徐 佳，邵昱昊，韩宗玺，李慧昕，孔宪刚，刘胜旺

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)为Nido病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属抗原三群的代表[1]，能引起鸡的急性、高度接触性传染病。呼吸道上皮细胞为IBV的主要增殖部位，感染鸡表现呼吸道症状。但部分病毒株也可以在感染鸡的肾脏、输卵管和肠道等组织器官的上皮细胞中复制和增殖，损害肾脏，造成感染鸡死亡，蛋鸡产蛋量下降，给养禽业造成严重的经济损失。

IBV含有4种结构蛋白：纤突蛋白(S)、小膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)。IBV的N蛋白由mRNA65'端独特区编码，分子量约为45 ku，磷酸化后分子量约为51 ku，占病毒蛋白总量的40%。N蛋白对病毒基因组的复制、亚基因组RNA转录、翻译具有一定作用。而且N蛋白具有良好的免疫原性，是诱导体液免疫应答和细胞免疫应答的重要免疫原蛋白[2]。

本研究应用杂交瘤技术获得分泌抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞株，为建立鸡传染性支气管炎(IB)检测方法及相关研究提供依据。

1 材料和方法

1.1 主要材料 IBV tl/CH/LDT3/03[3]、IBV分离株CK/CH/LDL/97Ⅰ、IBN、M41、CK/CH/LSD/05Ⅰ、CK/CH/LHN/00Ⅰ和CK/CH/LAH/08Ⅱ的N蛋白、BL21(DE3)和SP2/0细胞均由本实验室保存；雌性BALB/c小鼠由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供；pGEX-6p-1购自Amersham-Pharmacia公司；弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂购自SEPPIC MONTANIDETM公司；二氨基联苯胺(DAB)、HAT、HT和聚乙二醇(PEG1450)均购自Invirogen公司；MAb亚类鉴定试剂盒购自Southern Biotech公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠lgG购自Sigma公司。

1.2 抗原的制备 将tl/CH/LDT3/03分离株尿囊腔接种9日龄～11日龄SPF鸡胚，37℃培养72 h，收集尿囊液。1000 r/min 4℃离心30 min，收集上清，3500 r/min离心30 min，将上清12000 r/min离心30 min，收集上清。……