禤雪梅　江国荣（广东省佛山市第一人民医院药剂科　佛山　528000）



中药山茱萸中马钱素的提取工艺研究

禤雪梅江国荣（广东省佛山市第一人民医院药剂科佛山528000）

摘要：目的：探讨中药山茱萸中有效成分马钱素的提取工艺。方法：以提取温度、提取时间、溶剂用量作为参考因素，超声波提取工艺，采用L9（34）正交试验表进行工艺优化设计，马钱素含量采用高效液相色谱法进行测定（色谱柱：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），流动相：甲醇：水=30∶70，检测波长为236nm，柱温：25℃，流量1.0mL/min）。结果：山茱萸中马钱素最佳提取工艺为提取温度为80℃，提取时间为105min，溶剂95%乙醇用量为50mL。该方法提取出的马钱素含量为14.25mg/g。结论：超声提取优化工艺后方法简便可行，得到的山茱萸中马钱素含量较高。

关键词：山茱萸超声提取马钱素高效液相色谱法

山茱萸（Cornus officinalis Sieb. Et Zucc）为山茱萸科植物山茱萸的果实，是重要的野生植物资源，同时是我国传统的中药材植物之一［1］。山茱萸临床上具有补益肝肾、涩经固脱之效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、尿频、崩漏等症［2］。目前研究中认为山茱萸中含有的熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、马钱素以及没食子酸等是主要活性成分［3］。马钱素是一种环烯醚萜苷类化合物，也是重要的心血管活性物质，在预防心血管疾病等方面效果显著［4］。2015年版《中国药典》中记载的测定方式来测定马钱素的量控制山茱萸的质量，将中药山茱萸应用于临床等各个方面的研究，以发挥我国丰富野生自然资源的作用。本研究中以超声提取作为山茱萸中马钱素的提取手段，以L9（34）正交试验表，将提取温度、提取时间、溶剂用量作为参考因素进行工艺优化设计，马钱素的含量测定采用高效液相色谱法。现将研究报道如下。

1　仪器与试药

1.1试验仪器：高效液相色谱仪采用美国Watershed公司生产的色谱仪器（主要包括Waters717泵，WatersECM温度控制器，Waters717色谱数据工作站），YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm）色谱柱，KQ-101型超声发生器（昆山市超声仪器有限公司），电子分析天平（美国梅特勒公司，精度：0.0001g），514紫外/可见分光光度计（安捷伦科技公司），R-203旋转蒸发器，DKS-14型电热恒温水浴锅，SHZ-M循环水式真空泵。

1.2试验药品：中药山茱萸粉末（由中药材公司提供的新鲜山茱萸经过去核、真空减压干燥、粉碎机粉碎后过60目筛），马钱素对照品（中国食品药品检定所，纯度为99.97%），甲醇溶液（杭州高晶精细化工有限公司）为色谱纯，95%乙醇溶液，无水乙醇（北京化学科技有限公司），乙腈（上海生物科技有限公司）为分析纯，水为双蒸水。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的配制：精密称取马钱素对照品5.1g，置于5mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度摇匀后静置，甲醇补充不足的溶液至刻度后，配制成马钱素1.02mg/mL的对照品溶液，放置于4℃冰箱中备用。

2.2色谱条件的选择：采用色谱柱：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），流动相：甲醇∶水=30∶70，检测波长为236nm，柱温：25℃，流量1.0mL/min，进样量为20μL。理论塔板数按照马钱素色谱法计算不低于3000［5］。在上述色谱条件下，马钱素与其他成分均可以达到良好的色谱分离。见图1。

2.3线性关系的考察：分别吸取“2.1”项下的对照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分别置于5.0mL容量瓶中，用甲醇溶液定溶至刻度后摇匀，过0.22μm微孔滤膜后，分别取20μL重复进样3次，按照“2.2”项下的色谱条件进行含量测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制线性关系方程：Y=120410X+119874，r= 0.9997，马钱素在0.0510～0.510mg范围内线性关系良好。

2.4精密度试验：精密吸取“2.1”项下的对照品溶液20μL，重复连续进样5次，按照线性关系方程进行计算，结果表明马钱素5次进样峰面积的相对标准差为RSD=1.95%，表明该方法下样品的精密度良好。

2.5稳定性试验：将过40目筛的山茱萸样品按照超声提取方式进行回流提取，吸取一定量的山茱萸溶液利用甲醇溶液定溶至10mL容量瓶中，分别于0、1、2、4、8、12、24、36、72h取20μL，按照“2.2”项下的色谱条件进行含量测定，结果RSD值为4.23%，表明样品溶液在72h内含量稳定。

2.6重现性实验：取山茱萸供试品溶液适量，精密称定后按照马钱素定量方法重复测定5次，结果显示RSD为0.74%，表明样品测定的重现性较好。

3　提取工艺试验

3.1高效液相色谱法测定提取样品中马钱素的含量：在同一色谱条件下，比较进样量相同的对照品及样品的出峰时间，出峰时间相同则为同一个组份，后根据线性关系方程对样品中马钱素的含量进行定量测定［6］。

3.2提取溶剂对山茱萸中马钱素提取效果的影响：取中药山茱萸药材粗粉末约1.0g，精密称重后治愈离心管内，加入适量的甲醇溶液10mL提取20min后置于3000rad/min离心机中分离5min，将上清液过滤，残渣继续加入甲醇溶液10mL进行第二次提取，共提取5次后，合并滤液。马钱素是一种水溶性的环烯醚萜苷类化合物，因此试验中选择了极性较大的95%乙醇溶液、甲醇溶液以及双蒸水作为提取溶剂进行比较，回流提取温度均为65℃，回流时间均为60min。其中马钱素的含量测定方式为将定溶至5mL的样品进行稀释，吸取20μL溶液后按照“2.2”项下的色谱条件分别重复进样3次，以线性回归方程测定质量浓度，见表1。

3.3正交试验：为确定中药山茱萸中马钱素的最佳提取工艺，以提取温度、提取时间、溶剂用量作为参考因素，采用L9（34）进行正交试验，各因素水平见表2。

表1　不同溶剂提取马钱素的含量比较（%）

表2　超声波提取山茱萸中马钱素因素水平表

3.4正交试验结果：山茱萸中马钱素的超声波提取正交试验结果见表3。

表3　超声波提取山茱萸中马钱素的正交试验结果

4　小结

马钱素是中药山茱萸中的主要活性成分［7］，在山茱萸中的含量较高，性质稳定，采用高效液相色谱法进行含量的测定操作方法简便，重现性较好。

4.1提取溶剂的影响：提取溶剂的极性对于马钱素的提取效率影响较大，95%乙醇溶液的提取效果好于采用甲醇或双蒸水溶液对马钱素的提取。

4.2提取温度、时间的影响：对于超声波提取方式，提取温度对于山茱萸中马钱素的提取效率影响较大，最佳的提取温度为80℃，同时提取时间对山茱萸中马钱素含量的影响有一定的决定性，超声波提取条件下最佳的提取时间为105min左右。

4.3乙醇体积对提取工艺的影响：正交试验结果表明，乙醇体积的多少对提取效率影响不大，因此考虑提取工艺的经济性，在不影响马钱素含量的条件下，较少的乙醇用量可以应用于提取工艺。本研究中通过试验确定最佳提取工艺为：在80℃的条件下，加入95%乙醇溶液的量为50mL，进行超声提取105min得到最大含量的马钱素。该方法操作简单，易行。

参考文献

［1］吴立明.山茱萸研究现状和开发前景［J］.中国中医药信息杂志，2012，6（8）：32-34.

［2］俞坚，励建荣，郑群雄.微波提取山茱萸马钱素的工艺研究［J］.浙江工商大学学报，2010，4（1）：45-47.

［3］吕鹏飞，李倩.山茱萸中马钱素标准版的制备研究［J］.河南职工医学院学报，2010，22（5）：529-531.

［4］徐立华，彭国平.山茱萸水煎醇沉工艺的正交实验研究［J］.南京中医药大学学报，2010，16（5）：291-292.

［5］呼海涛，张振凌，朱瑄.山茱萸不同工艺炮制品中马钱素含量比较［J］.时珍国医国药，2010，18（5）：1072-1074.

［6］郭富礼，张振凌.山茱萸不同炮制品中熊果酸含量的比较［J］.时珍国医国药，2010，13（7）：524.

［7］潘扬，王天山，张弦，等.RP-HPLC法测定中药山茱萸中马钱素的含量［J］.南京中医药大学学报（自然科学版），2010，16（1）：25-27.

The study of extraction process of loganin in Chinese medicine dogwood

Abstract：Objective：To investigate the extraction process of loganin in Chinese medicine dogwood. Methods：The extraction temperature，extraction time and the amount of solvent were as the reference factors，ultrasonic was used for extraction process. The L9（34）orthogonal test table was for design optimization process，and the loganin were determined by high performance liquid chromatography（column：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），mobile phase：methanol：water=30∶70，the detection wavelength was 236nm，column temperature：25℃，flow rate was 1.0mL/min）. Results：The temperature of dogwood Loganin optimum extraction extraction was 80℃，extraction time was 105min，the amount of solvent was 95%，ethanol was 50mL. The method of extracted loganin content was 14.25mg/g. Conclusion：The method of ultrasonic extraction optimization technology is simple and feasible，and the content of dogwood Loganin is higher.

Key words：Dogwood Ultrasonic extraction Loganin HPLC

中图分类号：R284.1

文献标识码：B

文章编号：1672-8351（2016）06-0118-03