张晓琍，王金龙，林光华，曹颖平，周建林

免疫人群乙肝抗体阳性率调查及乙肝核心抗体检测方法探讨

张晓琍1，王金龙1，林光华1，曹颖平1，周建林2

目的 调查我院检测人群乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)及乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)阳性率，并探讨检测方法选择及检测操作模式对免疫人群乙肝核心抗体结果的影响。方法 统计2012—2013年用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)和酶联免疫竞争抑制一步法(ELISA)检测乙肝人群的HBsAb及HBcAb阳性率，并按≤2岁、2～20岁、>20岁3个年龄分段比较；收集92例免疫人群样本用CMIA和3种ELISA法检测HBcAb；用同种ELISA法试剂，改变操作模式进行HBcAb检测。结果 3组年龄段检测人群HBsAb两种检测方法统计的阳性率无统计学差异，≤2岁组阳性率最高；HBcAb用CMIA法统计的阳性率在≤2岁组和2～20岁组的免疫人群组低于ELISA法。 92例样本用CMIA法检测HBcAb阳性率为2.2%；用3种ELISA法试剂检测阳性率分别为79.3%、82.6%及94.6%；3种ELISA法试剂检测阳性率无统计学差异。92例样本改变操作模式，用同种ELISA法检测试剂检测结果有19例为阴性，差异有统计学意义。结论 检测人群HBsAb检出率在2岁及以下人群最高，随年龄增长抗体下降。 HBcAb用CMIA法检测在免疫人群中检出阳性率明显低于EIISA法。ELISA竞争抑制一步法检测HBcAb易造成假阳性，如改用HBcAb单项加样操作或选用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测，可明显减少假阳性。

乙型肝炎病毒表面抗体；乙型肝炎病毒核心抗体；抗体检测；酶联免疫吸附法；化学发光微粒子免疫检测法

乙肝核心抗体(HBcAb)是感染乙肝病毒的标志，具有流行病学意义，在人群中可长期存在，阳性率高达70%以上。我国已于1981年实行血源性乙肝疫苗接种，1989年改用重组基因疫苗，1992年全国推行乙肝疫苗接种，因此疫苗人群HBcAb抗体阳性率理论上应显著减小。在实际工作中发现由于选择的检测方法及检测时加样模式的差异,结果差别较大。本文调查人群HBsAb、 HBcAb阳性检出率，并对HBcAb检测试剂及检测方法进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 调查我院2012年1月—2013年7月，用CMIA法检测的样本共35 927例，其中男19 401例，女16 526 例。用ELISA法检测的8 094例样本，其中男4 998例，女3 039例。依据临床经验，1.5岁以下幼儿可能存在来自母体的抗体，1992年推行乙肝疫苗接种,20岁以下人群均可能是免疫人群,故人群按≤2岁；2～20岁；>20岁3个年龄段统计两种检测方法的的HBsAb、 HBcAb阳性检出率。并从中选取年龄在2～20岁的92例 ELISA检测HBcAb阳性，HBsAg阴性的样本,其中男性52例,女性56例，平均年龄11岁，进行HBcAb检测方法及试剂的分析。

1.2 试剂和仪器 (1)北京拓普公司DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机；美国BIO-RAD 680 酶标仪；Abbott I2000SR全自动免疫分析仪。(2)试剂和方法：试剂1：化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)，AbbottI2000SR全自动免疫分析仪配套试剂，结果值≥1 S/C.O为阳性；试剂2 ：英科新创厦门科技有限公司ELISA法；试剂3：北京万泰生物有限公司ELISA法；试剂4：上海科华生物有限公司ELISA法；EIA结果值≤1 S/C.O为阳性。所有试剂盒严格按说明书操作。

1.3 方法 试剂2检测阳性的92例HBsAg阴性样本用试剂1检测、试剂3和试剂4平行检测HBcAb。并用试剂2进行乙肝5项操作检测HBcAb(模式1)和单项HBcAb操作(模式2)两种操作模式结果比较分析。所有试剂盒严格按说明书操作。

1.4 统计学分析 四种试剂检测结果计数资料比较采用χ2检验。ELISA法两种操作模式数据S/CO值采用配对t检验。

2 结 果

2.1 人群HBsAb、 HBcAb阳性率分别见表1、2。

2.2 四种不同HBcAb试剂检测结果表3。

表1 检测人群HBsAb阳性率

表2 检测人群HBcAb阳性率

表3 四种不同HBcAb试剂检测结果

2.3 92例HBcAb阳性样本3种ELISA法检测结果分析，结果见表4。

表4 三种ELISA法检测结果分析

2.4 92例样本HBcAb用ELISA法试剂1两种操作模式测定结果分析。见表5。

表5 两种操作模式测定结果分析

3 讨 论

本文调查我院35 927例的3组年龄段人群HBsAb阳性检出率，现用的CMIA法和ELISA两种检测方法检测HBsAb的阳性率相近，2岁以下儿童因普及免疫接种或有来自母体的抗体,阳性率最高,但随年龄增长,免疫接种人群抗体浓度会下降，结果与文献报道一致[1-3]；因此按《中国慢性乙肝防治指南》(2010版)[4]，免疫接种后12年左右，或高危人群可进行HBsAb定量检测，对HBsAb小于10 mIU/mL的免疫人群，应给予免疫加强。HBcAb阳性检出率在≤2岁组和2～20岁组检测CMIA法阳性率为35.1%和16.9%，明显低于ELISA法的88.3%和78.9%, 结果表明免疫人群HBcAb检测阳性率因所选用的检测方法与试剂结果差别显著。

本实验中选取的92例样本皆为1992年后出生HBsAg阴性的免疫人群的样本，该人群大部分是重组基因疫苗接种人群，免疫后HBcAb阳性率理论值应较小。本研究的结果表明，ELISA法试剂2检测收集的92例样本3种ELISA试剂的阳性率分别为79.3%、82.6%及94.6%，明显高于CMIA法检测结果, 差异有统计学意义。证实由于检测方法学差异，ELISA法造成HBcAb在乙肝免疫人群中有很高的假阳性率。免疫人群HBcAb 阳性结果会对免疫加强或疫苗免疫效果产生误导，应该引起重视。

HBcAb是临床乙肝抗原抗体联合检测项目之一，ELISA检测中大多实验室采用平行加样，即一次操作多个项目。但HBcAb所使用的竞争一步法ELISA检测，由于方法学限制，若操作同一批次时检测样本量较大， HBcAb加样时间差无论手工或全自动酶免工作站，都明显高于单项HBcAb检测，导致检测结果假阳性率增高，并随时间差增大影响明显[5-6]。本研究中92例5项检测中HBcAb阳性样本，经同一厂家同批号HBcAb单项重复检测，可检出19例阴性，结果表明操作模式的不同可造成假阳性结果。成军等[7]采用酶和样本先混合再加入微孔中，可明显减少时间差造成的假阳性，但在实际操作中受限于试剂盒中酶试剂量以及操作麻烦，不易被采用。HBcAb单项操作，明显缩短加样的时间，临床操作可行性较大，实验室应改变操作模式，尽可能缩小时间差，减少检测假阳性。

HBcAb检测用竞争一步ELISA法，操作和方法学均容易产生假阳性，在临床上亦有相关在乙肝人群中有假阴性报告[8]，此项目的检测缺陷容易给临床造成困扰，研究结果表明如改用HBcAb单项加样操作，或选用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测，可明显减少假阳性。

[1]Pan XC. Study on immune persistence of 2 159 children injected with recombinant HBV vaccine[J]. Zhejiang J Prev Med, 2008, 20(9): 16-18. (in Chinese) 潘学春. 2 159名儿童重组乙肝疫苗免疫持久性研究[J]. 浙江预防医学,2008,20(9):16-18.

[2]Liu XL. On the effect of immunization for HBV vaccine[J]. J Dali Univ, 2008, 7(6): 41-42. (in Chinese) 刘鲜丽. 免疫接种乙肝疫苗防治效果探讨[J]. 大理学院学报,2008,7(6):41-42.

[3]Jilg W, Hottentrager B, Weinberger K, et al. Prevalence of markers of hepatitis B in the adult German population[J]. J Med Virol, 2001, 63(2): 96-102.

[4]Chinese Society of Hepatology and Chinese Society of Infectious Diseases Chinese Medical Association. The guideline of prevention and treatment for chronic Hepatitis B (2010 version)[S]. Chin J Hepatol, 2011, 19(1): 13-23. (in Chinese) 中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南(2010版)[S]. 中华肝脏病杂志,2011,19(1):13-23.

[5]Cheng J, Sun CG, Cheng YS, et al. The effects of different operating modes to the competitive ELISA method for detection of anti-HBV[J]. Chin J Clin Lab Sci, 2008, 26(3): 207-208. (in Chinese) 成军,孙长贵,成玉生,等. 不同加样方式对竞争ELISA法检测抗HBc 的影响[J]. 临床检验杂志,2008,26(3):207-208.

[6]Weber B, Melchior W, Gehrke R, et al. Hepatitis B virus markers in anti-HBc only positive individuals[J]. J Med Virol, 2001, 64(3): 312-319.

[7]Cheng J, Xie Y, Wang GZ, et al. Clinical significance of anti-HBc-IgG only positivity of HBV markers in serum[J]. Int J Lab Med, 2006, 27(3): 203-205. (in Chinese) 成军,谢钰,王国政,等. 乙型肝炎血清学标志物单项抗HBc-IgG 阳性结果的解释及临床意义[J]. 国际检验医学杂志,2006,27(3):203-205.

[8]Jiang F, Hu DY. Study the factors of the one-step competitive ELISA method for detection of anti-HBc[J]. West China Med J, 2005, 20(2): 365. (in Chinese) 江帆,胡定远. 酶免疫竞争一步法检测乙型肝炎病毒核心抗体影响因素探讨[J]. 华西医学，2005,20(3):365.

•消息•

《中国人兽共患病学报》开通微信公众平台订阅号

微信公众平台是为媒体和个人提供新的信息传播方式，构建与用户之间更好的沟通与管理的新一代网媒平台。利用微信公众平台给特定的用户推送各类资讯，内容丰富，信息交流高效、及时。

为了提升期刊影响力，实现信息传播的覆盖面和效果的最大化，《中国人兽共患病学报》开通微信公众平台：中国人兽共患病学报，订阅号：rsghb87552018；及时推送本刊当期目录、中英文摘要、全文链接、本刊动态、会讯、作者编者以及读者信息互动。欢迎各位读者、作者订阅。您只需点击微信，查找公众号：中国人兽共患病学报，添加关注后即可成为本刊的微信平台用户，或扫一扫微信二维码：

Prevalence of anti-HBV antibody among immunized population and evaluation of different detection methods of anti-HBc antibody

ZHANG Xiao-li1,WANG Jin-long1,LIN Guang-hua1,CAO Ying-ping1,ZHOU Jian-lin2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,FujianMedicalUniversityUnionHospital,Fuzhou350001,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,theThirdAffiliatedHospitalofFujianMedicalUniversity,Fuzhou350005,China)

In this study, we detected the positive rate of anti-HBs and anti-HBc antibody among the subject population in Fujian Medical University Union Hospital, and to evaluate different detection methods of anti-HBc antibody. The positive rate of anti-HBs and anti-HBc antibody were detected by chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) and one-step competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) from the year 2012 to 2013. The subject population was divided into three groups: group 1 with the age of less than 2 years old, group 2 with the age of 2-20 years old, and group 3 with the age of more than 20 years old. The positive rates of anti-HBV antibody in the different groups were analyzed. Furthermore, anti-HBc antibody of 92 samples selected from the immunized population was detected by CMIA and three kinds of ELISA reagents. Meanwhile, the detection of anti-HBc antibody by the same ELISA reagent but different operating modes were performed in these samples. The highest positive rate of anti-HBs antibody was detected in group 1, and there was no significance difference of positive rate between two detection methods of anti-HBs antibody among three groups. The positive rate of anti-HBc antibody using CMIA was significantly lower than those with ELISA among group 1 and 2. Among the 92 samples, the positive rate of anti-HBc antibody was 2.2% using CMIA. With three kinds of method of ELISA reagent, the positive rate of anti-HBc antibody were 79.3%, 82.6% and 94.6%, respectively, and there was no statistical significance among the results of three ELISA reagents. Anti-HBc was not detected from 19 samples using ELISA methods with different operating modes. It's concluded that the anti-HBs antibody declined with the increase of age, and it is necessary to discriminate the specific population to strengthen immune system. The obviously higher positive rate of anti-HBc antibody was found by ELISA in immunized population than that by CMIA. Concerning on the false positive of ELISA, specimen sampling with one specific test item or the CMIA method was recommended to detect the anti-HBc antibody.

anti-HBs antibody; anti-HBc antibody; antibody detection; enzyme-linked immunosorbent assay; chemiluminescent microparticle immunoassay

Cao Ying-ping, Email: caoyingping@aliyun.com

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.022

国家自然基金项目资助项目(81171656)资助

曹颖平，caoyingping@aliyun.com

1.福建医科大学附属协和医院检验科，福州 350001; 2.福建医科大学附属第三医院 ,福州 350000

R446.61

B

1002-2694(2015)03-0289-04

Supported by the National Natural Science Foundation of China (Grant No. 8117656)

2013-08-28；

2014-09-16