王金章,陈 炜,翁育伟,何文祥,张拥军,黄 萌,谢剑锋,郑奎城,严延生

2010年福建省肠道病毒71型血清流行病学调查

王金章,陈 炜,翁育伟,何文祥,张拥军,黄 萌,谢剑锋,郑奎城,严延生

目的 了解经过2008及2009年手足口病流行之后，福建省普通人群血清肠道病毒71型的抗体水平。方法 采集2010年福建省390名普通人群的血清标本，采用中和试验检测血清EV71中和抗体。结果 390名普通人群中和抗体阳性186人，阳性率47.69%。男女性别之间中和抗体阳性率及抗体滴度均没有统计学差异(χ2=0.42，P=0.52>0.05；U=-0.24，P=0.81>0.05)。各个年龄组之间的抗体阳性率及抗体滴度均有统计学差异(χ2=55.69，P=0.00<0.05；HC=50.36,P=0.00<0.05)，抗体阳性率最低的为0～岁年龄组，为16.67%，抗体阳性率随年龄增大而增高。0～4岁年龄组的抗体阳性率为25.33%，5～年龄组的抗体阳性率为61.67%，两者之间的抗体阳性率及抗体滴度均有统计学差异(χ2=48.85,P=0.00<0.05；U=-6.39，P=0.00<0.05)。结论 经过2008及2009年手足口病流行之后，福建省普通人群血清肠道病毒71型的抗体水平仍较低，特别是0～4岁年龄组的儿童。今后福建省仍会出现EV71作为主要病原体之一引起的手足口病疫情，易感人群仍为5岁组以下儿童，应继续加强监测和防控。

肠道病毒71型；中和抗体；血清流行病学调查

肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)为小RNA病毒科肠道病毒属成员，是引起手足口病(Hand-foot-mouth disease, HFMD)的主要病原体。EV71感染引起的手足口病，与非EV71感染引起的手足口病相比，临床表现没有明显的特异性，以发热和手、足、口腔和臀部等部位出现皮疹为主要临床特征的一种常见的急性传染病。多数患者预后良好，但有时会出现比较严重的并发症，如急性神经源性肺水肿、肺出血和心肌炎等心肺并发症和脑干脑炎、无菌性脑膜炎和类脊髓灰质炎样麻痹等神经系统并发症[ 1-2 ]。

自1997年开始，由EV71病毒引起的手足口病暴发公共卫生事件在东亚及东南亚逐渐增多，并经常引起社会恐慌[3]。2008年3月我国安徽省阜阳市等地区[ 4-5 ]出现了主要由EV71病毒引起的手足口病暴发流行，5月2日我国将手足口病纳入丙类法定传染病进行管理。福建省2008年及2009年也出现了手足口病流行，分别报告11 740例及19 226例手足口病病例，而EV71所占手足口病病原谱的构成比例均超过80%，分别为85.3%及80.7%，说明EV71是引起当前手足口病的主要肠道病毒。为了解经过2008年及2009年主要由EV71引起手足口病的流行之后，福建省普通人群EV71血清中和抗体水平状况，我们于2010年开展了福建省EV71型血清流行病学调查。

1 材料与方法1.1 血清标本来源 利用2010年福建省甲型H1N1抗体水平调查所采集的血清标本，选择390份不同年龄组的血清标本来检测其EV71中和抗体。具体年龄分组见表1，每个年龄组随机选择30份血清标本。

1.2 病毒抗原的制备 EV71病毒毒株(2010FJLY 008)株，GenBank accession No:HQ426649)由本实验室通过接种2010年福建地区手足口病患儿咽拭子标本于RD细胞，分离两代收获，并进行全长基因组核苷酸序列测定和分析[6]，确定其为2010年福建省本省的EV71型地方株。毒株的分离、滴定严格按照操作规程[7]进行操作。

1.3 检测方法 使用96微孔板中和试验检测血清EV71中和抗体，具体操作步骤参照[7]，血清中和抗体<1∶8为阴性，≥1∶8为阳性。

1.4 资料分析 数据录入到Excel文档，使用SPSS13.0(SPSS Inc., Chicago, USA)统计软件对数据进行处理和分析。

2 结 果

2.1 不同年龄组抗体阳性率的比较 390份血清标本中，186份EV71中和抗体阳性，阳性率为47.69%。各个年龄组的EV71中和抗体阳性率，详见表1及图1。EV71中和抗体阳性率最低的为0～岁年龄组，为16.67%，4～岁及以下年龄组的抗体阳性率均低于35%，5～岁及以上年龄组的抗体阳性率均高于50%，抗体阳性率随年龄增大而增高。通过对各个年龄组抗体阳性率进行χ2检验分析，各个年龄组之间的抗体阳性率差异具有统计学意义(χ2=55.69，P=0.00<0.05)；同时，采用秩转换的非参数检验对各个年龄组的血清标本抗体滴度进行分析，结果显示各个年龄组之间的抗体水平差异也有意义(HC=50.36,P=0.00<0.05)。

2.2 不同性别抗体阳性率的比较 390份血清标本中，其中男性血清标本208份，中和抗体阳性96份，阳性率46.15%；女性血清标本182份，阳性90份，阳性率49.45%，具体每个年龄组的男女血清中和抗体阳性率见表1。经过χ2检验，男女之间血清标本的EV71中和抗体阳性率没有差异(χ2=0.42，P=0.52>0.05)；同时，通过对男女之间血清标本的EV71中和抗体滴度进行秩转换的非参数检验，男女之间血清标本的EV71中和抗体水平差异也无统计学意义(U=-0.24，P=0.81>0.05)。

2.3 中和抗体水平构成比 在调查的390份血清标本中，中和抗体滴度<1∶8的有204份(52.31%)，1∶8-1∶32的有118份(30.26%)，1∶64-1∶128的有55份(14.10%)，≥256的有13份(3.33%)，具体见表2。中和抗体检测结果为阴性及低抗体水平的血清标本占主要部分。

图1 2010年福建省EV71血清抗体阳性率

3 讨 论

EV71是引起手足口病(Hand-foot-mouth disease, HFMD)的主要病原体，全球很多国家和地区报道了EV71引起的手足口病疫情及其EV71的流行基因型等相关的病原学特征。但是，目前针对普通人群EV71中和抗体的血清流行病学报道研究较少。本研究利用2010年福建省甲型H1N1抗体水平调查所采集的普通人群血清标本，标本覆盖的年龄组从0～10岁的每个年龄组，同时涵盖了成人组等年龄组，并使用χ2检验和秩转换的非参数检验两种方法对结果进行统计分析。因此，能够比较全面和客观地反映了EV71中和抗体水平在普通人群中的变化特征。

表1 不同年龄段及性别的EV71中和抗体阳性率

表2 不同年龄段的EV71中和抗体构成比

通过对不同年龄组的EV71抗体阳性率及抗体滴度分别采用χ2检验和秩转换的非参数检验进行统计分析，结果显示不同年龄组的抗体阳性率和抗体滴度均有统计学意义，表明普通人群不同年龄组抗体水平是有差异。0～4岁年龄组的抗体阳性率为25.33%，5～年龄组的抗体阳性率为61.67%，对0～4岁年龄组与5～年龄组的抗体阳性率及抗体滴度分别采用χ2检验和秩转换的非参数检验进行统计分析，结果显示0～4岁年龄组与5～年龄组的抗体阳性率及抗体滴度均有统计学意义(χ2=48.85,P=0.00<0.05；U=-6.39，P=0.00<0.05)，表明5～年龄组人群的EV71血清抗体水平比0～4岁年龄组人群高。同时，从表1及图1可以得到人群中EV71抗体阳性率随年龄增大而增高，0～4岁年龄组每个年龄组的EV71抗体阳性率均<35%，而5～年龄组的抗体阳性率均≥50%，维持在一个相对稳定的水平。这些与手足口病发病率以4岁及以下年龄组为主，同时发病率随着年龄的增长而降低的疫情特点相符合。也与国内外有关报道[8-10,12]基本一致。

对手足口病主要患者人群0～4岁组中男女抗体水平进行比较，男性抗体阳性率为23.86%，女性的抗体阳性率为27.42%，虽然女性的抗体阳性率比男性高，但是分别采用χ2检验和秩转换的非参数检验对其抗体阳性率及抗体滴度进行统计分析，结果显示0～4岁组中男女之间的抗体阳性率及抗体滴度均无统计学意义(χ2=0.24，P=0.62>0.05；HC=-0.25,P=0.80>0.05)。提示0-4岁组中男女之间的EV71血清抗体水平是相似的，这与手足口病疫情中的男性发病率明显高于女性存在差异，其原因有待进一步研究。

本研究的标本覆盖年龄组从0～10岁的每个年龄组，同时涵盖了成人组等年龄组，但缺少婴儿1～12月月龄组的EV71血清抗体水平变化资料。Eng-Eong Ooi等[8]在对新加坡EV71血清流行病学调查中报道，带母亲血清抗体的新生儿血清44.0%具有EV71抗体，但1个月后迅速消退；Mei Zeng等[9]对上海儿童的EV71血清抗体流行病学调查中报道，1月新生儿的EV71血清抗体阳性率为67%，然后随着月龄的增大逐渐下降，10月及11月婴儿的EV71血清抗体阳性率为0。本研究0～岁组人群的中和抗体阳性率是所有年龄组中最低的，仅为16.67%，考虑为月龄相对较大的婴儿，因为月龄较大的血清相对于月龄较小的特别是0或1月新生儿来说，更容易获得。

2008年3月份手足口病在中国大陆地区开始大规模流行，2008年及2009年引起手足口病的主要病原体为EV71。在中国2008年手足口病大规模流行之前，部分研究者开展了EV71回顾性流行病学调查，如周世力等[10]检测1999-2003年深圳市584份正常人血清，其中5岁组以下的人群的EV71抗体阳性率为23.47%；郭学斌等[11]对2005年中国东南、西北、西南的3个县总计371名1～6岁儿童人肠道病毒71型血清进行流行病学调查，3个县儿童HEV 71中和抗体阳性率不同，但差异无显著的统计学意义，其中5岁组以下的人群的EV71抗体阳性率为40.40%；Zhen Zhu等[12]对2005年中国6个不同省份的900份5岁组及以下的儿童进行EV71回顾性流行病学调查，其EV71抗体阳性率为32.00%。本研究是在08年、09年的手足口病(主要病原体为EV71)大规模流行之后开展普通人群EV71血清中和抗体水平调查，0～4岁年龄组的抗体阳性率仅为25.33%，其抗体水平甚至比上述报道的2008年之前我国其它省份的相应年龄组人群还低，提示今后一段时间福建省仍然会有EV71作为主要病原体之一引起的手足口病流行，其主要的易感人群为5岁组以下儿童。因此，应继续加强手足口病的监测和防控工作，特别要防控EV71引起的暴发和EV71引起的重症死亡事件。

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Sero-epidemiological investigation of Enterovirus 71 antibodies in Fujian Province, China, 2010

WANG Jin-zhang,CHEN Wei,WENG Yu-wei,HE Wen-xiang,ZHANG Yong-jun,HUANG Meng,XIE Jian-feng,ZHENG Kui-cheng,YAN Yan-sheng

(FujianCenterforDiseaseControlandPrevention,Fuzhou350001,China)

In order to investigate EV71 antibody levels among general population from Fujian Province after the 2008-2009 HFMD epidemics, 390 sera-specimens were collected from 390 participants in 2010. EV71-specific antibody was detected by neutralization test, indicating 186 (47.69%) sera of 390 were EV71-seropositive. Although the difference by gender was not statistically significant on positive rates and antibody titers, significant differences were observed in positive rates and antibody titers among age groups. The positive rate was increasing with age, while the 0 age-group yielded the lowest positive rate of 16.67%. Subsequently, significant difference was detected among positive rates and antibody titers between age groups of 0 to 4 years-old and 5-years-old, with the positive rate of 25.33% and 61.67%, respectively. Therefore, the EV71 antibody levels among general population from Fujian Province after the 2008-2009 HFMD epidemics was still in the low level, especially the age groups of 0 to 4 years-old. The epidemic of HFMD mainly caused by EV71 will still occur in the future, and children under 5 years old are major susceptible population, continuously intensive surveillance, prevention and control are required.

Enterovirus 71; neutralizing antibody; seroepidemiology survey

Yan Yan-sheng, Email: yysh@fjcdc.com.cn

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.008

国家科技重大专项《艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治》(2012ZX10004-210-003)

严延生，Email：yysh @fjcdc.com.cn

福建省疾病预防控制中心，福建省人兽共患病研究重点实验室，福州 350001

R183.4

A

1002-2694(2015)03-0227-05

Supported by the National Mega-Project of Science & Technology for Infectious Diseases in China (No. 2012ZX10004-210-003)

2014-05-16；

2014-08-07