吴才良，龙琼先，刘欣雅，王平

（南充市中心医院·川北医学院第二临床学院病理科，南充 637000）

在临床实践中，很多患者就诊时已出现体液，为了明确形成体液的原因，常抽取体液做病理学分析。过去常用的检测方法是标本离心后涂片法，此方法收集到的细胞较少，背景干扰因素多；目前广泛应用于临床的体液检查方法是液基细胞学和离心沉淀物细胞块检查。本院对送检的体液标本首先做液基细胞学检查，如有疑问，则进一步做离心沉淀物细胞块检查。但仅用HE观察切片，难以明确病变性质及组织来源，为此本文浅谈免疫组化检测在体液中的作用及价值，并探讨免疫标记的选择方法。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集本院2009年1月～2012年10月临床各科室送检的体液标本148例，男86例，女62例；年龄20～85岁，平均年龄53岁；其中22例患者行手术切除病变。选用CK（pan）、CK7、CEA、TTF-1、NapsinA、P63、CD56、Syn、CDX-2、TTF-1、WT-1、PAX-8、ER、PRVim、LCA 等抗体，均从北京中杉生物公司购买。

1.2 方法

将送检的新鲜体液标本（放置时间＜2h）置于50mL离心试管内，2 000r/min，离心10min，弃去上清液，如沉淀物较少，再次中速离心5～10min弃上清液，沉淀物中加入10%中性甲醛50mL固定12h，收集所有固体物用包埋滤纸包裹，放入脱水机中脱水、透明、浸蜡，切片后脱蜡至水，进行常规HE染色。需要行免疫组化染色的病例按常规要求进行染色，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封固。显微镜下观察HE及免疫组化染色结果，并将体液离心沉淀物细胞块诊断与手术切除组织诊断进行比较。

2 结果

2.1 HE及免疫组化诊断

148例体液标本经观察HE染色切片后，确定为良性病变78例，恶性病变56例，另有14例无法判断其良恶性。14例无法判断良恶性病例经免疫组化染色后诊断为恶性9例；65例恶性病例经免疫组化染色后能确定组织来源60例，无法确定组织来源5例。

2.2 体液中的肿瘤类型

148例体液标本中，经免疫组化染色诊断恶性肿瘤65例，确定组织类型60例，常见肿瘤有肺癌、卵巢癌、肝癌，其类型具体分布如下（见表1）。

表1 肿瘤在体液中分布类型（n）

2.3 离心沉淀物细胞块诊断与手术切除组织诊断的比较

具有体液表现的148例患者中22例进行了手术切除，术后组织均诊断为恶性肿瘤；体液离心沉淀物细胞块检查漏诊病例1例，符合率为95.5%。

3 讨论

1853年Downe率先从体液中发现恶性肿瘤，开创了浆膜腔积液脱落细胞学诊断的先河。而积液细胞学诊断最重要的是鉴别良性或恶性，其次识别组织类型，同时探讨原发部位［1］。常规使用的离心涂片法，阳性细胞的检出率较低，主要原因是：1）常规涂片法中所收集的细胞数量少，标本中大量细胞随残液弃去。2）制出的涂片厚薄不均，细胞重叠堆积，常常造成诊断困难而出现假阴性。3）常规涂片中高分化腺癌细胞与间皮细胞鉴别困难，又无法进行免疫组织化学染色，不能做出肯定的诊断。制备离心沉淀细胞块切片及免疫组化联合多抗体检测明显减少了人为主观因素的影响，使结果更具科学性。据文献［2］报道细胞块切片检查较传统的细胞学涂片诊断阳性率高10倍。奉孝荣等［3］回顾性分析85例组织学证实的胸腹腔肿瘤所致的胸腹水沉积物，离心沉淀细胞块检查全部为阳性，而传统的细胞学涂片阳性为49例。

免疫组化是肿瘤病理诊断中常用的技术，其结果有助于确定肿瘤的良恶性、组织亚型及组织来源。就体液细胞学的病理诊断联合应用多种抗体的免疫组化有助于鉴别间皮细胞和恶性上皮细胞，有助于确定转移性肿瘤的组织来源［4－6］。本研究应用免疫组化检测14例HE染色无法确定性质的病例发现有9例为恶性，应用免疫组化染色确定组织类型有60例。免疫组织化学可提高阳性检出率，由常规HE染色的37.8%提高到47.3%。在本研究中，我们认为应结合临床病史、其他相关检查及HE镜下特点选择合适的标记。首先要确定体液中细胞是增生的间皮细胞还是癌细胞，常选用的标记是 MC、D2-40、EMA、CEA；其次是针对不同体液确定肿瘤细胞的组织来源。胸水病例主要考虑肺癌相关免疫标记，如TTF-1、P63、NapsinA及CK14；腹水病例主要考虑胃肠癌、肝癌、女性卵巢癌及男性前列腺癌等相关免疫标记，如CDX-2、MUC-2、AFP、CA125、PSA 等。Westfall等［7］研究认为对男性患者的体液细胞宜选用calretinin、TTF-1、P504S、PSA 和 CDX-2，女性患者宜选用calretinin、TTF-1、WT-1、PAX-8、ER、PR和CA125。

本研究显示免疫组化检测体液细胞的病理诊断与手术切除组织的病理诊断符合率为95.5%，仅有1例因肿瘤组织为混合性组织类型，体液细胞有限，未能做出准确的诊断。由此可见，结合临床病史及HE镜下特点，选择恰当的免疫标记，可以准确地诊断体液细胞的性质，协助判断组织来源。对无手术指征的晚期肿瘤患者，检测体液细胞的免疫表型能确定肿瘤的性质及组织来源，有助于晚期肿瘤患者的治疗。

［1］马正中，阚秀，刘树范，等.诊断细胞病理学［M］.郑州：河南科技出版社，2000：249-250.

［2］刘福川，程继荣，王小兵，等.细胞学中细胞块的应用价值［J］.实用医技杂志，2004，11（5）：681-683.

［3］奉孝荣，陈莉，梁辉，等.胸腹水沉渣切片在脱落细胞学中的作用［J］.西部医学，2010，22（7）：1230-1231.

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［5］Yaziji H，Battifora H，Barry TS，etal.Evaluation of 12 antibodies for distinguishing epithelioid mesothelioma from adenocarcinoma： identification of a three-antibody immunohistochemical panel with maximal sensitivity and specificity［J］.Modern Pathology，2006，19（4）：514-523.

［6］Tseng CJ，Jain S，Hou HC，etal.Applications of the telomerase assay in peritoneal washing fluids［J］.Gynecol Oncol，2001，81（3）：420-423.

［7］Westfall DE，Fan X， Marchevsky AM.Evidence-based guidelines to optimize the selection of antibody panels in cytopathology：pleural effusions with malignant epithelioid cells［J］.Diagnostic Cytopathology，2010，38（1）：9-14.