付明伟, 葛 敏

(南京工业大学 生物与制药工程学院,江苏 南京 210009)

MLN8237【化学名称:4-{[9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂卓-2-基]氨基}-2-甲氧基苯甲酸,Chart 1】是一种新型的极光激酶(Aurora-A)抑制剂，目前正处于小规模临床Ⅱ期试验阶段，主要用于治疗铂类药物治疗无效或治疗效果不佳的上皮性卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌[1]。

合成MLN8237的文献[2]方法是：以2-氨基-5-氯苯甲酸为原料，与苯甲酰氯酰化后关环，然后在丁基锂存在下用间氟苯甲醚开环、水解、重氮化和碘取代;再通过Sonogashira反应引入胺丙炔基、脱保护关环得到希望的七元环;最后通过与关键中间体(9)的缩合和进一步关环得到MLN8237。重复文献[2]方法时，在关键的丁基锂开环步骤中产率极低，同时制备的9纯度很差，导致终产品MLN8237的纯度很低。

Chart 1

本文在文献[2]方法的基础上改进了2,3及9的合成方法(Scheme 1), MLN8237的总产率从4.0%[2]提高至12.3%，纯度高于98.5%,其结构经1H NMR和MS确证。

Scheme1

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

Bruker DRX 300/500 MHz型核磁共振仪(CDCl3为溶剂,TMS为内标);Applied Biosystems API 2000型液相色谱质谱联用仪(LC-MS)。

所用试剂均为分析纯或化学纯。

1.2 合成

(1) 4-胍-2-甲氧基苯甲酸盐酸盐(9)的合成

在反应瓶中依次加入4-氨基-2-甲氧基苯甲酸6.0 g(35.9 mmol), 1,4-二氧六环60 mL和50%氨基腈溶液14.4 g,搅拌下于90 ℃反应20 min。缓慢降温至0 ℃，搅拌1 h，过滤，滤饼减压干燥至恒重得白色固体9 3.3 g,产率37.2%; ESI-MSm/z: 210.0{[M+H]+}。

(2) 2-苯甲酰胺基-5-氯苯甲酸(1)的合成

在反应瓶中依次加入2-氨基-5-氯苯甲酸31.0 g(181 mmol)和THF 600 mL,搅拌下于0 ℃滴加苯甲酰氯53 mL(451 mmol),滴毕,于25 ℃反应16 h(TLC跟踪)。倒入冰水中，搅拌1 h,用浓盐酸调至pH 2(悬浊液)，过滤,滤饼用甲醇洗涤,真空干燥至恒重得白色固体143.5 g,产率93.5%; ESI-MSm/z: 274.2{[M-H]-}。

(3) 6-氯-2-苯基-4H-苯并[d][1,3]噁嗪-4-酮(2)的合成

在反应瓶中加入138.5 g(139.6 mmol)和醋酸酐270 mL,搅拌下回流反应3 h(TLC跟踪)。降温后倒入水中搅拌1 h,用二氯甲烷(3×300 mL)萃取，合并萃取液,用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,浓缩得白色固体235.8 g,产率99.4%;1H NMRδ: 8.20～8.18(d,J=7.1 Hz, 2H), 8.12～8.11(d,J=2.3 Hz, 2H), 7.99～7.96(dd,J=8.7 Hz, 2.5 Hz, 1H), 7.76～7.68(dd,J=15.1 Hz, 8.7 Hz, 2H), 7.66～7.58(m, 2H)。

(4)N-[4-氯-2-(2-氟-6-甲氧基苯甲酰基)苯基]苯甲酰胺(3)的合成

在反应瓶中加入3-甲氧基氟苯14.1 g(111.6 mmol)和THF 100 mL,搅拌下于-78 ℃缓慢滴加2.5 mol·L-1正丁基锂的正己烷溶液44 mL，滴毕，加入220.0 g(77.6 mmol),搅拌下反应至终点(TLC跟踪)。倒入冰水中，用乙酸乙酯(3×200 mL)萃取，合并萃取液，依次用盐酸、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体317.1 g,产率57.4%;1H NMRδ: 12.56(s, 1H), 9.07～9.04(d,J=9.2 Hz, 1H), 8.15～8.06(d,J=6.6 Hz, 1H), 7.63～7.42(m, 6H), 6.87～6.82(m, 2H); ESI-MSm/z: 384.3{[M+H]+}。

(5) 1-(2-氨基-5-氯苯基)-1-(2-氟-6-甲氧基苯基)甲酮(4)的合成

在反应瓶中加入335.0 g(91.2 mmol),甲醇441 mL, KOH 46.2 g(819 mmol)的水(80.5 mL)溶液，搅拌下于66 ℃下反应16 h(TLC跟踪)。减压蒸除甲醇，用乙酸乙酯(2×250 mL)萃取，合并萃取液，依次用3 mol·L-1盐酸与饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后用石油醚(100 mL)搅拌分散，过滤，滤饼干燥得白色固体424.3 g,产率95.3%; ESI-MSm/z: 280.3{[M+H]+}。

(6) 1-(5-氯-2-碘苯基)-1-(2-氟-6-甲氧基苯基)甲酮(5)的合成

在反应瓶中加入438.0 g(136.0 mmol),醋酸152 mL和浓盐酸57 mL,搅拌下于0 ℃～5 ℃滴加亚硝酸钠10.3 g的水(103 mL)溶液，滴毕，反应30 min;滴加乙酸乙酯266 mL,滴毕，反应20 min;于0 ℃～5 ℃加入KI 27.1 g(163 mmol)的水(114 mL)溶液，缓慢升温至25 ℃反应1 h(TLC跟踪)。用乙酸乙酯(500 mL)稀释，依次用饱和亚硫酸钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,浓缩后用乙醚/乙酸乙酯重结晶得黄色固体545.5 g,收率85.8%;1H NMRδ: 8.02～7.72(d,J=7.9 Hz, 1H), 7.61～7.56(m, 1H), 7.39～7.35(m, 2H), 7.02～7.00(d,J=5.1 Hz, 2H), 6.96～6.93(m, 1H)。

(7)N-叔丁氧羰基-3-[4-氯-2-(2-氟-6-甲氧基苯甲酰基)苯基]-2-氨基丙炔(6)的合成[2,4]

在反应瓶中依次加入57.0 g(17.9 mmol),N-叔丁氧羰基氨基丙炔3.1 g(19.7 mmol),双(三苯基膦)二氯化钯1.0 g(1.4 mmol), CuI 0.27 g(1.4 mmol),二氯甲烷70 mL和二乙基胺9.9 mL,搅拌下于25 ℃反应16 h(TLC跟踪)。减压蒸除溶剂后经硅胶柱层析[洗脱剂:V(DCM) ∶V(Pet)=1 ∶1]分离得无色油状液体66.8 g,产率90.7%; ESI-MSm/z: 440.0{[M+H]+}。

在反应瓶中依次加入613.0 g(30.0 mmol),二氯甲烷130 mL,甲酸30 mL和硫酸汞2.8 g(9.6 mmol), 搅拌下于25 ℃反应2.5 h(TLC跟踪)。在冰水浴下用水(32 mL)和浓氨水(32 mL)稀释,用二氯甲烷(3×200 mL)萃取，合并萃取液，用水洗涤，减压蒸除溶剂得油状液体(中间体,15.6 g);溶于浓盐酸(260 mL)与1,4-二氧六环(260 mL)中，反应30 min;加入二氯甲烷200 mL，用碳酸钠调至pH 10，反应1 h。分层，水相用二氯甲烷(2×150 mL)萃取，合并萃取液，用水洗涤，无水硫酸钠干燥,浓缩后经硅胶柱层析[洗脱剂: A=V(EA) ∶V(Pet)=1 ∶4]分离得无色油状液体77.0 g,产率70.7%; ESI-MSm/z: 318.3{[M+H]+}。

在反应瓶中依次加入71.6 g(5.0 mmol),甲苯53 mL,N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(DMFDMA) 10.7 mL,搅拌下于80 ℃反应2 h(TLC跟踪)。减压蒸除溶剂后经硅胶柱层析(洗脱剂: A=1 ∶4)分离得黄色固体81.4 g，产率71.8%;1H NMRδ: 8.02～7.99(d,J=8.3 Hz, 1H), 7.80(s, 1H), 7.49～7.46(d,J=7.9 Hz, 1H), 7.37～7.29(m, 1H), 7.19(s, 1H), 6.91～6.71(m, 2H), 4.95(s, 1H), 3.77～3.64(m, 5H), 3.64(s, 6H); ESI-MSm/z: 373.3{[M+H]+}。

(10) MLN8237的合成[2,7]

在反应瓶中依次加入82.7 g(7.2 mmol),92.1 g(8.7 mmol), K2CO32.5 g(18.1 mmol)和甲醇67.5 mL,搅拌下于65 ℃反应18 h(TLC跟踪)。倾入冰水中，用盐酸调至pH 1，用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取，合并萃取液，用水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后经硅胶柱层析(洗脱剂: A=3 ∶2)分离得灰白色固体MLN8237 2.3 g,产率61.2%,纯度97.5%(HPLC);1H NMRδ: 12.07(s, 1H), 10.22(s, 1H), 8.73(s, 1H), 8.32～8.29(d,J=8.5 Hz, 1H), 7.96(s, 1H), 7.83～7.80(dd,J=8.5 Hz, 1.9Hz, 1H), 7.73～7.70(d,J=8.6 Hz, 1H), 7.46～7.36 (m, 2H), 7.21(s, 1H), 6.88(s, 2H), 4.86(s, 1H), 3.83(s, 6H); ESI-MSm/z: 519.2{[M+H]+}。

2 结果与讨论

在2的合成中，按照文献[2]提供的一步法得到的是中间体苯甲酰胺;苯甲酰胺在醋酸酐中经回流反应可制得2[3]。

在3的合成过程中，温度变化均会导致反应得到不同的结果。一定要注意加丁基锂时要缓慢并保持低温。

在9的合成中，采用了一步法[6]，产率37.2%。与文献[2]提供的三步反应工艺(三步总产率约40%)相比，产率相近，但大大简化了工艺步骤，并缩短了反应时间。

[1] 胡笳. 铂类耐药或难治上皮性卵巢癌、输卵管癌、原发性腹膜癌MLN8237单药治疗疗效可[J].全球肿瘤快讯,2010,(28):37-39.

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