李 燃,任丽丽,康 凯

哈尔滨医科大学附属第一医院重症医学科,黑龙江哈尔滨 150001

脓毒症主要指由感染引起的全身炎症反应综合征,对患者生命健康造成严重影响[1]。感染性休克是脓毒性症最严重的一种形式,当发生感染性休克时会出现组织缺氧、代谢紊乱、器官功能损坏等[2]。感染性休克会加重缺血再灌注损伤、释放大量炎症因子、激活中性粒细胞,从而引起更严重的免疫炎症反应[3]。目前研究表明,感染性休克与机体炎症反应密切相关,当机体内炎症水平上升可进一步加速疾病进展。Toll样受体4(TRL4)信号通路在炎症反应的发生、发展过程中发挥重要作用,其中在感染性休克患者中,上调TRL4信号通路可促进炎症因子的释放,增强炎症反应[4]。TRL4可通过接头分子MyD88的作用对白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)进行激活,IRAK1、TRAF6作为MyD88信号通路下游因子,二者表达变化与机体炎症反应及免疫功能密切相关[5]。研究发现,IRAK1与脓毒症患者的预后,以及TRAF6与脓毒症并发肺损伤均密切相关[6-7]。然而,关于IRAK1、TRAF6在感染性休克患者中的表达研究较少,因此,本研究检测感染性休克患者IRAK1、TRAF6的表达变化,以期为评估感染性休克患者病情严重程度及临床早期诊断提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2020年11月至2022年11月收治的142例感染性休克患者(感染性休克组)为研究对象,其中男76例,女66例,年龄22～78岁,平均(49.55±12.87)岁。另选取同期在本院进行体检的健康者131例为对照组,其中男68例,女63例,年龄23～80岁,平均(47.63±11.22)岁。根据感染性休克组患者住院观察治疗28 d后的生存状况分为生存组100例和死亡组42例,其中生存组男54例,女46例,年龄22～74岁,平均(48.32±11.76)岁;死亡组男23例,女19例,年龄29～78岁,平均(51.34±12.97)岁。纳入标准:(1)符合感染性休克患者评断标准[8];(2)具有完整的临床病理资料;(3)年龄≥18岁。排除标准:(1)合并免疫系统、恶性肿瘤或血液系统疾病;(2)存在恶性肿瘤;(3)合并抑郁症、痴呆或其他精神疾病;(4)存在严重炎症反应。本研究获本院伦理委员会批准(批号:202001036)。所有患者或其家属知情并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1临床资料采集 采集两组体重指数(BMI)、体温、平均动脉压、胆固醇、肌酐临床资料。

1.2.2治疗方法 对感染性休克患者治疗措施主要有进行呼吸机辅助呼吸,广谱抗菌药控制感染,营养支持,建立静脉输液通道,纠正电解质酸碱平衡,对症治疗等;监测感染性休克患者入院时及治疗2、4、6 d后IRAK1、TRAF6表达,并记录患者急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分[9]及序贯器官功能衰竭评估(SOFA)评分[10]动态变化。

1.2.3IRAK1、TRAF6表达测定 使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法对感染性休克组及对照组外周血中IRAK1、TRAF6表达进行测定。抽取患者空腹静脉血3～5 mL,待血液凝固后低温离心取分离血清(4 ℃,4 000 r/min,15 min)。利用Trizol法提取血清中的总RNA(Trizol试剂购于美国Ambion公司,批号149105),使用紫外分光光度计(日本岛津)对总RNA浓度和纯度进行测定,总RNA浓度、纯度合格。使用逆转录盒(德国Qiagen公司,批号:218061)将RNA逆转录为cDNA,然后使用荧光定量PCR仪(美国ABI公司,型号:ABI-7300)进行测定,引物序列见表1。以β-actin为内参,使用2-ΔΔCt法计算IRAK1、TRAF6相对表达水平[11]。

表1 引物序列

2 结 果

2.1两组临床资料比较 感染性休克组与对照组在性别、年龄、BMI、体温、平均动脉压、胆固醇、肌酐比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组临床资料比较

2.2入院时感染性休克组与对照组IRAK1、TRAF6相对表达水平及APACHEⅡ评分、SOFA评分比较 入院时感染性休克组IRAK1、TRAF6相对表达水平显著低于对照组,APACHEⅡ评分、SOFA评分显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 入院时两组IRAK1、TRAF6相对表达水平及APACHEⅡ评分比较

2.3死亡组与生存组IRAK1、TRAF6相对表达水平及APACHEⅡ评分、SOFA评分比较 与入院时比较,治疗2、4、6 d后两组IRAK1、TRAF6相对表达水平均显著升高,APACHEⅡ评分、SOFA评分均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与死亡组比较,生存组在各个相应时间点IRAK1、TRAF6相对表达水平均较高,APACHEⅡ评分、SOFA评分均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 两组IRAK1、TRAF6相对表达水平、APACHEⅡ、SOFA评分比较

2.4APACHE Ⅱ评分、SOFA评分与IRAK1、TRAF6的相关性分析 相关性分析显示,感染性休克患者IRAK1、TRAF6与APACHE Ⅱ评分、SOFA评分均呈负相关,见表5。IRAK1与TRAF6呈正相关(r=0.688,P<0.05)。见图1。

图1 IRAK1与TRAF6的相关性分析

表5 APACHE Ⅱ评分、SOFA评分与IRAK1、TRAF6的相关性分析

2.5Logistic回归分析 将感染性休克患者生存状况作为因变量(死亡=1,生存=0),以感染性休克患者IRAK1、TRAF6、APACHEⅡ评分为自变量,进行多因素Logistic回归分析。研究发现,IRAK1、TRAF6及APACHE Ⅱ评分是影响感染性休克患者生存状况的独立危险因素(P<0.05)。见表6。

表6 感染性休克患者生存状况影响因素的Logistic回归分析

2.6IRAK1、TRAF6对感染性休克患者生存状况的诊断价值分析 以感染性休克患者否死亡作为状态变量,以生存组和死亡组IRAK1、TRAF6为自变量进行ROC曲线分析。结果得出,IRAK1单独诊断感染性休克患者生存状况的曲线下面积(AUC)为0.786(95%CI:0.712～0.859,截断值为0.43,灵敏度为59.0%,特异度为49.9%;TRAF6单独诊断感染性休克患者的生存状况的AUC为0.739(95%CI:0.640～0.839,截断值为0.450,灵敏度为84.0%,特异度为46.1%;二者联合诊断感染性休克患者的生存状况的AUC为0.886(95%CI:0.824～0.949,灵敏度为90.0%,特异度为66.3%;二者联合诊断的AUC显著大于IRAK1单独诊断的AUC(Z=2.044,P=0.041),以及TRAF6单独诊断的AUC(Z=2.442,P=0.015)。见图2。

图2 IRAK1、TRAF6诊断感染性休克患者生存状况的ROC曲线

3 讨 论

感染性休克因病死率高、病情发展迅速、预后不良等特点而备受重症医学领域的关注[12]。若不能对感染性休克患者进行及时地诊断和治疗,后期则会引发机体组织细胞缺血、代谢系统紊乱、缺氧,从而导致多器官功能衰竭,严重时则威胁患者生命安全[13-14]。近年来研究表明,早期诊断、及时治疗对改善感染性休克患者预后有明显的提高作用。因此,寻找能有效评估感染性休克患者的生物学指标,对感染性休克患者进行早期监测和及时治疗,以及改善患者生存状况具有重大意义[15]。

IRAK1是先天免疫系统的重要组成部分,在多种病原体和细胞因子反应过程中发挥着重要调节作用[16]。龙瑞文等[17]研究发现IRAK1在类风湿关节炎患者外周血中出现低表达,IRAK1可能在类风湿关节炎发病过程中发挥着作用。TRAF6是一种泛素E3连接酶,在多种生物调控过程中发挥作用[18]。研究发现miR-146通过抑制TRAF6表达,而发挥负调节作用,从而参与口腔扁平苔藓免疫反应中[19]。TLR4作为Toll样受体家族成员之一,在免疫反应和炎症反应过程中发挥着重要的调节作用。IRAK1、TRAF6作为TLR4通路中重要的转导分子,当IRAK1、TRAF6表达改变或TLR4出现异常激活状态时,会引发炎症反应异常和免疫应答失衡等现象[20]。本研究结果显示,入院时感染性休克组IRAK1、TRAF6相对表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与死亡组比较,生存组在各个相应时间点IRAK1、TRAF6相对表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05),说明IRAK1、TRAF6在感染性休克患者中呈低表达,可能是由于TLR4通路活化程度减弱,使IRAK1、TRAF6呈低表达,从而对下游多种细胞因子的分泌产生影响,进而使炎症反应异常、免疫应答失衡并导致感染性休克的发生。本研究相关性分析显示,感染性休克患者IRAK1、TRAF6与APACHE Ⅱ评分、SOFA评分均呈负相关,IRAK1与TRAF6呈正相关(r=0.688,P<0.05),提示IRAK1、TRAF6在感染性休克中可能起协同作用,共同参与了感染性休克的发病过程,此外二者与患者病情程度呈负相关,二者表达越低,患者病情越严重。Logistic回归分析表明,IRAK1、TRAF6、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分是影响感染性休克患者生存状况的独立危险因素,提示IRAK1、TRAF6可能是预测感染性休克患者生存状况的潜在生物标志物;ROC曲线分析结果显示,与IRAK1、TRAF6二者独立预测感染性休克预后相比,二者联合预测灵敏度和特异度更高,表明IRAK1联合TRAF6诊断感染性休克患者的生存状况可提高诊断效能,二者联合诊断感染性休克患者生存状况具有较高价值。

综上所述,感染性休克患者IRAK1、TRAF6异常表达,均与病情严重程度有关,对感染性休克生存状况具有一定的预测价值,且二者联合诊断预测价值更高。IRAK1、TRAF6有望成为感染性休克患者临床诊治指导和预后评估的潜在生物标志物。但本研究样本量有限,下一步研究可增加样本量对相关调控机制进行深一步研究。