胡哲夫,唐其柱,吴青青,冯一洲,周晨亮

心肌肥厚及纤维化常伴有成纤维细胞的过度增殖和胶原分子的合成、分泌。炎性反应和氧化应激等一直是心肌纤维化的元凶之一,其机制复杂且涉及多种炎性分子。既往研究表明,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)具有促炎、促氧化应激等多重作用[1-2]。崔勤涛等[3]应用LPS刺激引起H9c2细胞内发生强烈的氧化应激反应并使活性氧(ROS)显著升高。3,3'-二吲哚甲烷(Diindolylmethane,DIM)属于十字花科植物的天然成分提取物[4-6],其广泛存在于多种常见的十字花科蔬菜中,如卷心菜、雪里红、诸葛菜等。已有研究表明,DIM具有抗肿瘤、抗炎、抗增生等多种生理作用[4-7]。另有研究证实,DIM可弱化压力负荷及其他机制诱导的心肌肥厚和纤维化反应[8]。因此本研究拟用LPS刺激H9c2细胞的增殖,并以DIM干预,来观察DIM是否对LPS诱导的H9c2细胞增殖能力及氧化应激产生影响,报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)H9c2细胞(典君生物科技发展有限公司提供);(2)药品及试剂:3,3'-二吲哚甲烷(上海融禾医药科技发展有限公司,100 mg,纯度>98%)、脂多糖(PEPROTECH公司),胰蛋白酶消化液(Gibco公司)、新生胎牛血清(Gibco公司)、DMEM/F12培养基(上海立菲公司)、双抗(Hyclone公司), CCK-8试剂盒(日本同仁化学研究所);(3)仪器设备:细胞计数仪(Invitrogen公司,型号 C10227),流式细胞仪(美国BD FACScalibur公司, 型号 BD FACSCalibur 1),荧光酶标仪(Synergy HT公司,型号 Synergy H1),恒温培养箱(赛默飞公司,型号Thermo 311)。

1.2 实验方法 2020年10—12月于代谢与相关慢病湖北省重点实验室进行实验。H9c2细胞培养于37℃、CO2体积分数为5%的恒温培养箱中,采用含有20%NCS和1% 双抗(青霉素+链霉素)的DMEM/F12培养基中培养,使用对数生长期的细胞。当……