张云宁 罗云 丁婧 程远灿 曹国平(泰兴市人民医院 输血科，江苏 泰兴 225400)

不规则抗体是指除抗-A、抗-B 以外的血型抗体，也称意外抗体，多经妊娠或输血免疫应答产生，可导致(不全)流产、死胎、新生儿溶血病或溶血性[1-4]、迟发性血清学输血不良反应等[5]，也是干扰血型鉴定和交叉配血的主要因素之一。 我们在对1 名长期依赖输血的血液病患者交叉配血时发现高效价(IgG＋IgM)抗-Mur，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 患者，男，48 岁，全血细胞减少10 余年，伴有脂肪肝、高血压9 年余。 从2017 年10 月起患者常因贫血、头昏乏力加重入住本院，临床诊断“骨髓增生异常综合症(MDS)不能排除”，给予静脉丙球、美罗华等治疗，长期依赖输B、RhD＋红细胞纠正贫血。 所有B、RhD＋血液(包括献血者1 及其他献血者)均来源泰州市中心血站。

1.2 试剂与仪器 血型鉴定卡(强生，批号:ABR356F)，抗人球蛋白检测卡(长春博迅，批号:20221201)， 不规则抗体筛选细胞(长春博迅，批号:20221206/20230203)，谱细胞(上海血液生物，批号:20230105/20230309)，2-Me(上海血液生物，批号:20217703)，人类红细胞稀有血型基因分型试剂盒(荧光PCR 法)(江苏中济万泰，批号:20230103)，抗-M(上海血液生物，批号:20220725)，抗-N(上海血液生物，批号20220620)，抗-Mia(Immucor 公司，批号:NMIA00401)，抗-s(Immucor，批号:625029)， 抗-S(Immucor，批号:20230131)。AutoVue lnnova 全自动血型及配血分析系统(Ortho 公司)，2005-2 型离心机(贝索公司)，FYQ 型试剂卡孵育器、TD-3A型血型血清学用离心机(长春博研)。

1.3 方法

1.3.1 血型鉴定 采用微柱凝胶法检测ABO 血型。

1.3.2 直接抗人球蛋白试验 将红细胞稀释成1%浓度，取50 μL 加入抗人球蛋白卡中，置专用37℃孵育箱15 min 后400×g 离心2 min，665×g 离心3 min。 红细胞沉于凝胶底部的为阴性，悬浮于凝胶表面或中间的为阳性。

1.3.3 特珠介质交叉配血 采用IgG 微柱凝胶卡法。

1.3.4 不规则抗体检测IgM 类抗体 取3 只试管，分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号抗体筛选细胞50 μL，再各加入患者血清100 μL，混匀。 1 500×g 离心15 s 观察凝集强度；IgG 类抗体:取IgG 微柱凝胶卡分别加入1%的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞50 μL和受检者血浆100 μL，置专用37℃孵育器孵育15 min 后放入血型血清学专用离心机400×g 离心2 min，665×g 离心3 min，观察结果。 红细胞沉于凝胶底部为阴性、悬浮于凝胶表面或中间为阳性。

1.3.5 抗体特异性鉴定 采用盐水试管法和微柱凝胶抗人球蛋白卡将患者血清分别与由10 人份O 型红细胞组成的1%谱细胞及1%自身红细胞反应。 与谱细胞凝集、与自身红细胞不凝集者为特异性抗体，根据与谱细胞在不同介质中的反应格局判定IgM 型和IgG 型抗体的特异性。

1.3.6 抗体效价测定 IgM 型效价:在10 mm×70 mm 玻璃试管中加入用生理盐水倍比稀释患者血清与谱细胞反应格局中出现凝集的最强或混合谱红细胞等量，1 500×g 离心15 s，取出均匀轻揺试管至底部细胞泛起观察结果，以凝集强度≥1＋的血清最高稀释倍数报告IgM 效价；IgG 型效价:取患者血清100 μL 与2-Me 应用液等比例混合后密封，37℃孵育30 min后取100 μL 灭活液用生理盐水倍比稀释，采用微柱凝胶法与谱细胞反应格局中出现最强凝集或混合阳性的谱红细胞反应测定其效价，以凝集强度≥1＋的血清最高稀释倍数报告IgG 型效价。

1.3.7 MNS 及其它稀有血型系统抗原 采用基因检测(荧光PCR 法) 严格按操作说明书操作。

2 结果

2.1 血型鉴定及不规则抗体筛查 患者及所有献血者血型均为B 型，RhD＋。 微柱凝胶法和盐水试管法不规则抗体筛查结果患者均为阴性，见表1、表2。

表1 患者血清不规则抗体筛查结果(一)

表2 患者血清不规则抗体筛查结果(二)

2.2 交叉配血及直接抗人球蛋白试验 患者与献血者1 配血呈主侧4＋、次侧-，其它多名献血者配血结果均为阴性；献血者1 与其它B、RhD＋献血者配血结果均为阴性。 献血者1直抗试验为阴性。

2.3 谱细胞抗体特异性鉴定 患者血清与2 个批号谱细胞在盐水介质中及血清经2-Me 处理后在IgG 微柱凝胶卡中反应格局如见表3、表4。

表3 患者血清与谱细胞反应格局(一)

表4 患者血清与谱细胞反应格局(二)

2.4 血清学检测结果及抗体效价 患者血清抗-Mia阴性，抗-M4＋，抗-N3＋，抗-S 阴性，抗-s 4＋。 IgG 型抗-Mur 效价为128，IgM 型效价为16。

2.5 患者稀有血型基因分型(荧光法)结果CCee，LW*A/LW*A，FY*A/FY*A，JK*B/JK*B，GYPA*M/GYPA*N，GYPB*s/GYPB*s，DI*02.04/DI*02.04，KEL*02/KEL*02，CO*A/CO*A，DO*A/DO*B，LU*B/LU*B，YT*A/YT*A。

2.6 Mur 抗原 献血者1 为阳性4＋，患者为阴性。

3 讨论

MNS 血型系统是继ABO 血型系统后第2 个被发现的血型系统，是最具多样性的血型系统之一，其复杂程度仅次于Rh 血型系统[6-7]。 MNS 血型抗原决定簇位于红细胞膜上的血型糖蛋白A 和血型糖蛋白B 上，并由相邻的GYPA和GYPB基因进行编码。 Mur 抗原属于MNS 系统中的Miltenberger(简称Mi)亚系列抗原，表达在GP.Mur、GP.Hop、GP.Bun、GP.Dane 表型红细胞上。 Mi 系列由11 种抗原交叉组合为11 种不同的表现型。 其中Mur 抗原存在于MiⅡ型红细胞上，是MNS 系统变异抗原中最常见的1 种抗原。 Mur 抗原在白种人和黑种人中罕见，血型频率仅0.012%[2]，但在华人中表达频率较高，甚至被称为“华人血型”，出现频率为4.75%～7.3%，但产生抗-Mur 的频率仅为0.18%[8]。

MNS 血型系统抗体有天然抗体和免疫抗体2 类，大部分是IgM 型天然抗体，少数是免疫刺激产生的IgG 型。 抗-M、抗-N 多为自然发生，且多为冷性抗体，临床意义不是很大，但抗-Mur 抗体多为免疫产生的抗体[9]，能够引起溶血性输血反应和新生儿溶血病等严重疾病[10-12]。

本例抗-Mur 的发现存在偶然性。 患者长期依赖输血，入院血型鉴定结果为B、RhD＋，不规则抗体未筛检出，但以抗人球蛋白微柱凝胶卡交叉配血过程中发现患者与献血者1 配血呈主侧4＋、次侧-。 据此首先考虑需验证双方ABO＼Rh 血型、患者不规则抗体及献血者直接抗人球蛋白试验。 排除双方血型错误因素后，可尝试更换不同的患者与该献血者，及不同的献血者与该患者重复交叉配血加以验证，本例患者仅与献血者1 配血呈主侧凝集而与其它献血者均相容；献血者1 与其它B、RhD＋血液配血亦均相容，说明在供、受双方间一定存在稀有血型系统抗原、抗体因素，在排除供者红细胞致敏因素后应再次用不同批号筛选细胞复查患者不规则抗体，尽管结果仍为阴性，但我们高度怀疑因不规则抗体筛查细胞存在局限性、不能全面覆盖红细胞血型抗原而导致某种低频抗体的漏检，继而追加了谱细胞检测并根据阳性反应格局来确定抗体类型及特异性并测定其效价。 结果也证实患者血清中存在(IgM＋IgG)型抗-Mur。 有条件时可运用荧光PCR 法对双方MNS 血型系统进行基因分型，GP.Mur 总是和s 共同遗传的[13]，该基因产生的s 抗原性质与正常s 抗原不同，可能红细胞与一些强的抗-s 血清不反应。 通常和Ms 共同遗传，其表型伴随“N”表达的增强。

临床交叉配血试验常发生配血不合的情况，如因妊娠、输血等原因致体内存在同种不规则抗体、自身免疫性疾病介导产生自身抗体、血清蛋白紊乱及药物因素等均可致配血不合。特别是长期反复输血的患者，体内易产生不规则抗体干扰血型鉴定和交叉配血[14]。 解决疑难配血的关键在于理清头绪后对交叉配血不合的原因做出初步判断，根据不同介质、不同的试验条件，正确选用抗体筛查和抗体特异性鉴定细胞[15]，鉴定出有临床意义的抗体，尤其要注意避免低频抗体的漏检。根据最终试验结果提供相合血液，保证临床输血安全。

本例中高效价低频抗-Mur 也只是在交叉配血主侧不合后被“意外”检出，同时借助MNS 血型分子生物学分型技术也进一步验证了血清学鉴定结果。 本研究发现，不规则抗体筛查细胞如缺少Mur 抗原，会造成抗-Mur 漏检致交叉配血不合。 患者此前多次配血未出现不相合现象，是因为Mur 抗原在人群中出现频率较低，患者抗-Mur 虽漏检但未接触到Mur抗原阳性者。 建议医疗机构为患者进行不规则抗体筛查时，尽量选择红细胞血型抗原覆盖面较广的抗体筛查细胞[16]，包含GP.Mur 红细胞显得尤为重要，以提高不规则抗体的检出率与保障输血的安全性，同时出具不规则抗体筛查报告时建议将“阴性”改为“未检出”，结果更准确。

致谢:江阴力博医药生物技术股份有限公司为本论文提供的基因检测技术支持

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。