张良子 左琴琴 吴大洲 张泳 褚晓月 张薇薇 王红 毛娟 徐华(陕西省血液中心，陕西 西安 710061)

输血作为临床治疗的1 种重要手段，在临床急救及许多疾病的治疗中起着无法替代的作用。 红细胞血型具有多种生物功能，但最主要的临床意义是具有抗原性[1]。 红细胞血型系统到目前为止已命名了45 个，共有360 种血型抗原[2]。其中高频抗原阴性或者多种常规抗原组合呈阴性的视为稀有血型[3]。 稀有血型的临床供应是1 个国际性难题，当稀有血型患者急需输血而又找不到相合的血液时，在医学上可能发生非常严重的并发症甚至导致死亡[4]，因此解决已产生相应意外抗体的稀有血型患者和有预见今后需多次输血的稀有血型患者输血难题的最佳手段便是建立稀有血型信息化供应平台。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017～2023 年6 月陕西省血液中心无偿献血者，年龄18 ～60 周岁，所有献血者均符合GB18467-2011《献血者健康检查要求》，标本采集已事先征得献血者的知情同意。

1.2 主要试剂与仪器

1.2.1 试剂 抗球蛋白试剂(上海血液生物医药有限责任公司)；分析纯尿素试剂(Vetec，批号:041M0013V)；抗-C，抗-c，抗-E，抗-e，抗-D，抗-M，抗-N，抗-P1(上海血液生物医药有限责任公司)；抗-Jka，抗-Jkb，抗-Fya，抗-Fyb，抗-Dia，抗-Lea，抗-Leb(GmbH，德国，克隆号:MS-15，MS-8，M235-2，M261-4，A3，M125-2，M113-2)等；血液基因组DNA 提取离心柱形试剂盒(Roche，瑞士)；人类红细胞稀有血型基因分析试剂盒(Innotrain Diagnostik GmbH，德国)；Taq 酶(Promega Corporation)；2X GC Buffer，6X Loading Buffer，dNTP，DL2000(TaKaRa，日本)，均在有效期内使用。

1.2.2 仪器 水浴箱(德国，GFL)；台式离心机(日本久保田，KA-2200 型)；显微镜(OLYMPUS，CX23)；全自动血细胞洗涤离心机(日本日立，MC450)；台式离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司，L600A)；PCR 仪(德国，Sensoquest Labcyler)；凝胶成像系统(Tanon 上海，T1600)。

1.3 鉴定红细胞血型试验方法 无偿献血者的红细胞血型鉴定按文献[1]的方法和试剂操作说明进行，M，N，P1，D，C，c，E，e，Jka，Jkb，Lea及Leb抗原采用盐水试管法进行鉴定；Dia，Fya，Fyb抗原采用抗人球试管法进行鉴定；无偿献血者Dib抗原采用实验室已建立并发表的Diego 血型基因分型方法[5]进行鉴定；Jk(a-b-)表型采用2mol/L 尿素溶解试验进行筛选。

1.4 稀有血型信息化供应平台的建立

1.4.1 血型与输血智慧实验室组成 血型与输血智慧实验室主要由用户端、应用支撑层、数据层、硬件层等部分组成，见图1。

图1 血型与输血智慧实验室的组成及功能

1.4.2 稀有血型信息化供应平台设计流程 稀有血型信息化供应平台依托血型与输血智慧实验室，并与SHINOW9.5系统关联。 由标本接收、结果登记、供者档案、库存血液4 个模块组成，各模块功能描述如下。 1)样本接收 录入待检测血型的无偿献血者献血码。 2)结果登记 登记无偿献血者各个血型系统抗原鉴定结果，保存后自动进入稀有血型信息化供应平台数据库。 3)供者档案 当收到非常见血型血液或稀有血型血液(缺失多个常规抗原或缺失某个高频抗原)申请时，在供者档案模块通过数据库查询相应抗原阴性的献血者及其血液状态(有无库存)。 4)库存血液 与SHINOW9.5 系统关联，动态监测稀有血型血液库存状态。

当实验室收到临床稀有或非常见表型血液申请时，实验室应先确定该患者所存在意外抗体的特异性，并与临床医生及医院输血科了解患者情况，例如血液申请的紧急程度、所需血液的血型表型及用血量、患者的用药史(可能会干扰输血相容性检测的药物)、患者的亲属信息等。 再通过血型与输血智慧实验室—稀有血型库—供者档案，查询库中是否有相应抗原阴性的献血者血液，若无可用的红细胞产品时，可进一步查询相容献血者相关信息进行献血招募。

1.4.3 稀有血型信息化供应平台数据采集 将疑难配血进行交叉配血时检测的无偿献血者血型、固定献血者(至少献过3 次血，且近12 个月内至少献血1 次的无偿献血者)的Rh、Kidd、Lewis、MNS、P、Diego、Duffy、Kell 血型及筛选O 型献血者D--、Jk(a-b-)、Dib-、Fya-血型分别导入、录入血型与输血智慧实验室—稀有血型信息化供应平台。

2 结果

2.1 西安地区无偿献血者人群Rh、MNSs、P1、Kidd、Lewis、Duffy 血型抗原分布 Rh 血型系统常规抗原C 阴性占比16.98%(1 048/6 144)，e 阴性15.22%(659/4 329)；MNSs 血型系统常规抗原M 阴性为25.65%(548/2 141)，N 阴性22.66%(46/203)；Kidd 血型系统常规抗原Jka阴性为28.16%(379/1 314)，Jkb阴性20.85%(281/1 247)。 Lewis 血型系统常规抗原Leb阴性占比20.18%(176/872)(表1)。

表1 西安地区无偿献血人群主要血型抗原分布

2.2 稀有血型献血者血型分布 在5 398 名Rh 阴性无偿献血者中筛查到稀有Rh 表型献血者273 名，其中A 型76 名，B型89 名，O 型85 名，AB 型23 名。 33 010 名无偿献血者中筛查到缺失多种常规抗原献血者51 名，其中A 型16 名，B 型25 名，O 型10 名。 筛查到缺失高频抗原的O 型献血者共13名，其中Jk(a-b-)表型为0.019‰(3/158 484)，Di(a＋b-)表型为0.436‰(2/4 586)，Fy(a-b＋)表型为4.03‰(8/1 983)，见表2。

表2 稀有血型献血者血型分布

2.3 稀有血型信息化供应平台的工作流程 第一步，录入待检测血型的无偿献血者献血码，见图2-A；第二步，登记无偿献血者各个血型系统抗原鉴定结果，保存后自动导入稀有血型信息化供应平台数据库，见图2-B；第三步，当收到非常见血型血液或稀有血型血液(缺失多个常规抗原或缺失某个高频抗原)申请时，在信息化供应平台查询相应抗原阴性的献血者及其血液状态(有无库存)，见图2-C；第四步，与SHINOW9.0 系统关联，通过平台实时监测稀有血型实体库血液库存状态，以备稀有血型患者的紧急用血，保障输血安全，见图2-D。

图2 稀有血型血液信息化供应平台的工作流程

2.4 稀有血型信息化供应平台的应用 患者1，2023 年4 月某三甲医院送检直肠静脉曲张便血患者，血型为A 型，ccDEe，M-N＋，Jk(a-b＋)，鉴定出存在IgM-M，IgG-C，IgG-Jka抗体，根据西安地区献血者人群抗原分布(表1)计算A 型献血者M，C，Jka均为阴性的概率为3.69‰。 通过查询稀有血型信息化供应平台筛选符合条件的献血者共3 名，见图3-A。患者2，2023 年6 月某三甲医院送检肝硬化上消化道出血患者，急需输血。 血型为B 型，CCDee，M-N＋，Jk(a＋b-)，血清中存在IgM-M，IgG-c，IgG-E，IgG-Jkb抗体，计算相容性献血者总概率为5.9‰。 查询稀有血型信息化供应平台筛选符合条件的献血者共15 名，成品库中有2U 红细胞悬液，解决了临床对于血液的迫切需求，见图3-B。

图3 稀有血型血液信息化供应平台的查询结果

3 讨论

在临床输血实践中，常有因妊娠或者多次输血产生多种意外抗体，导致抗体鉴定难度增加的案例。 安全输血面临的重要挑战之一就是保护受血者免受同种异体免疫对红细胞抗原的不良反应[6-8]。 2012—2023 年6 月，本实验室疑难配血患者标本数，产生特异性意外抗体的数量和种类都在攀升，患者体内存在两种以上意外抗体的发生率32.53%(349/1 073)，合并存在3 个血型系统的意外抗体共8 例。 为避免可能出现的输血安全问题，实验室需要准确鉴定患者体内意外抗体的特异性，并采用血清学方法和基因型方法鉴定患者血型抗原，以确定需要相合的献血者血型，评估相容献血者的频率。 计算相容献血者的频率，必须将同血型献血者的概率乘以每个抗原阴性献血者的概率[3]。 本文患者1，患者2因多次输血产生了3 个血型系统抗体，根据计算相容献血者总概率分别为3.69‰，5.9‰。 若仅含有这些意外抗体中的任何一种，要找到相合血液并不困难，但是合并多种意外抗体则需要筛选大量的血液才能找到相合的血液。

药物抗体也会干扰输血相容性检测的鉴定，接受CD38单抗治疗的多发性骨髓瘤患者大多将接受多次输血，为避免和推迟意外抗体的产生并排除漏检的风险[9]，本实验室选取与患者ABO、Rh、Kidd、Lewis 等多个血型系统相合的献血者血液，采用盐水法、凝聚胺法、抗球蛋白法进行交叉配血。 四个血型系统均相容的献血者频率低，要想获得匹配的血液，筛选过程中将耗费大量的人力、物力、财力。 一方面带给患者庞大的经济负担，另一方面仍不能确保筛选到相合的血液进而耽误患者的临床救治。 当患者再一次需要输血或者存在相同复杂意外抗体的其他患者需要输血时，仍将继续再一次重复如此的筛选工作[10-11]。

目前国内建立的稀有血型库大多指RhD(-)献血者的信息库和实体库，只有极个别采供血机构筛选缺乏某个(些)高频抗原如Jk(a-b-)，Dib，Fya等的血液或者献血者[12]。 当面临患者存在复杂意外抗体时，由于在献血人群中缺失多个常规抗原献血者的低分布，致使匹配困难，很难有更高效快捷的应对措施[13-15]。 随着信息技术的不断发展，医疗机构信息化建设逐步开始走向智能化发展方向，相较于采供血机构信息化建设的飞速发展，临床输血的信息化建设仍较落后，尤其是建立实验室与采供血机构信息共享平台层面。

因此，在献血人群中展开多种血型的筛选工作，建立稀有血型库信息化供应平台系统，筛选出足够多的稀有血型献血者，上传信息储备至可实时共享的信息化管理平台，并与采供血系统共享血液状态，可为稀有血型人士提供输血安全保障。 本研究依托血型与输血智慧实验室，设计与建立稀有血型信息化供应平台，实现与采供血系统并机联网，导入2017—2023 年6 月检测的5 398 名Rh 阴性无偿献血者血型，33 010 名无偿献血者血型及从十万多例O 型献血者中筛查到的稀有血型献血者血型。 数据库中记载稀有Rh 表型献血者信息273 例，缺失多种常规抗原献血者信息51 例，缺失高频抗原的O 型献血者信息共13 例，其中Jk(a-b-)表型3例，Di(a＋b-)表型2 例，Fy(a-b＋)表型8 例保存于稀有血型实体库。 当实验室收到临床稀有或非常见表型血液申请时，可通过稀有血型信息化供应平台查询是否有相应抗原阴性的献血者血液，若无可用的红细胞产品时，可进一步查询相容献血者相关信息进行献血招募。

综上所述，构建稀有血型血液信息化供应平台可解决临床上对稀有血型血液的迫切需求，减少输血反应的发生，提高输血疗效，将为稀有血型人士的医疗服务提供安全保障。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。