杨丽娟 胡燕 吴雅娟 张利 刘丽萍 彭涛 甘新宇(西部战区总医院 输血医学科，四川 成都 610036)

自体富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)因其高浓度的血小板被激活后可释放多种生长因子，在促进创面愈合、组织再生等方面的安全性和有效性得以证实和接受[1-3]。且其来自自体，安全性较高，可在临床各个领域都得到应用，如骨科、难治性皮肤溃疡、颌面外科、眼科运动医学以及整形美容科等[4-9]。 PRP 的制备可采用手工分离制备和采用血细胞分离机采集制备[10-11]，后者产品中血小板含量以及白细胞、红细胞残留量较为稳定和可控，但对患者心肺功能和血容量有一定要求，如体重较轻的患者血容量较少、年纪稍大的患者心肺功能对快速失血的耐受性相对较差，血小板计数稍低患者采集循环数需适当增加以及产品血小板浓度偏低等。 相应的专家学者也出具了PRP 制备技术和注射治疗方面共识[12～13]，但关于采集方面文献报道较少，现将本院采集的256 例PRP 患者数据分析报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2021 年6 月—2022 年6 月在本院接受PRP治疗的256 例患者。 使用NGL XCF 3000 血细胞分离机采集10～100 mL 不等的PRP 产品。 其中膝、肩、踝、骶髂关节以及股骨关节关节炎(痛) 152 例；半月板、髌骨损伤72 例，韧带损伤25 例，皮肤溃烂2 例，眼部疾病5 例。 所有接受PRP治疗者在治疗前常规检测血常规、血型和HBsAg、抗-HCV、抗-HIV 和抗-TP、凝血4 项； 所有患者均行自体PRP 治疗。本研究经过本单位医学伦理委员会批准(2023EC2-ky002)。

1.2 分组 1)按性别，分为男性组和女性组；2)按年龄(岁)分组:组1(18～40 岁)，组2(41～55 岁)，组3(56～77 岁)；3)按采集前Plt(×109/L)分组:组1[(100～150)×109/L]，组2[(151～200)×109/L]，组3[(201～450)×109/L]。

1.3 仪器和耗材 NGL XCF 3000 血细胞分离机以及1 次性使用成份分离器耗材(四川南格尔，型号P-2000IB)；法国ABX MICROS 60 血细胞分析仪及其配套试剂；山东威高集团医用高分子制品股份有限公司生产的抗凝剂(ACD-A)。

1.4 统计学处理 应用SPSS 24 统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 256 名PRP 采集患者基本信息 见表1。

表1 256 名PRP 采集患者基本信息(±s)

表1 256 名PRP 采集患者基本信息(±s)

例数(n) 年龄(岁) 体重(kg) 心率(次/min) Hb(g/L) RBC(×1012/L) Hct PLT(×109/L)总体 256 35±15 68±11 75±6 150±16 4.94±0.49 0.45±0.44 212±45性别 男性 194 30±12 71±11 75±6 156±12 5.11±0.40 0.47±0.03 211±45女性 62 51±15 59±8 75±5 131±10 4.40±0.36 0.40±0.03 211±46年龄(岁) 18～40 174 26±6 70±11 75±5 155±13 5.08±0.43 0.46±0.03 219±43 41～55 44 49±5 66±11 76±6 142±17 4.71±0.50 0.43±0.05 196±48 56～78 38 65±7 62±10 76±6 135±15 4.55±0.52 0.41±0.04 194±44 Plt 组1(100～150) 26 47±18 66±10 77±6 143±19 4.83±0.65 0.44±0.06 130±14(×109/L) 组2(151～200) 84 36±15 68±11 75±6 150±16 4.95±0.50 0.45±0.04 178±15组3(201～450) 146 33±15 69±12 75±6 151±15 4.96±0.46 0.45±0.04 242±30

2.2 256 名PRP 采集过程中各指标对比分析 数据显示:1)不同性别、不同年龄段和不同血小板计数的患者在采集时间、循环血量、采集量上均差异不明显(P＞0.05)；2)男性和女性患者采集后的产品白细胞、红细胞残存量和血小板含量亦差异不明显(P＞0.05)；3)不同年龄段的采集组，采集产品中白细胞含量随着年龄段的增加而增高，其中年龄较高组(组3，56～78 岁)白细胞残存量(0.64±0.41)×109/L 明显高于年龄较低组(组1，18～40 岁)的(0.50±0.35)109/L，差异显著(t＝2.076，P＜0.05)；4)不同血小板计数的采集组，血小板较低组1[组1，(100-150)×109/L]采集产品中白细胞、红细胞残存量均高于其它血小板计数组，且差异明显(P＜0.05)，同时产品中的血小板计数也显著低于其它血小板计数组(P＜0.05)(表2)。

表2 256 例PRP 采集过程中各指标对比 (±s)

表2 256 例PRP 采集过程中各指标对比 (±s)

注:采集时间、循环血量均已换算成以采集10 mL PRP 为基准；*1 血小板计数组1 白细胞残存量与组2、组3 比较，t 值分别为2.376、3.417，P值均＜0.05；*2 血小板计数组1 红细胞残存量与组2、组3 比较，t 值分别为3.216、2.585，P 值均＜0.05；*3 血小板计数组1 血小板含量与组2、组3 比较，t 值分别为2.815、4.042，P 值均＜0.05。

例数 采集时间(min) 循环血量(mL) 采集量(mL) WBC(×109/L) RBC(×1012/L) Plt(×109/L)性别 男 194 6±3 183±89 39±16 0.52±0.39 0.06±0.09 1082±273 62 7±3 199±72 41±17 0.60±0.35 0.08±0.05 1108±303年龄(岁) 18～40 174 6±3 182±90 38±17 0.50±0.35 0.06±0.09 1095±281 41～55 44 7±3 205±81 38±13 0.61±0.46 0.07±0.05 1123±294 56～78 38 6±2 187±65 44±16 0.64±0.41 0.07±0.04 1020±253 Plt 组1(100～150) 26 7±3 220±96 41±23 0.83±0.48*1 0.12±0.06*2 844±187*3(×109/L) 组2(151～200) 84 6±3 192±74 39±16 0.55±0.39 0.06±0.04 1036±251组3(201～450) 146 6±3 180±90 38±15 0.49±0.35 0.06±0.09 1148±285女

3 讨论

关于PRP 的采集与制备，国内虽出具了一些专家共识，但仍然缺乏统一的标准；不同性别、年龄段以及血小板计数不同的人群是否均可以采集并达到理想效果，目前还不清楚。 本数据采集患者在采集前均已排除相对采集禁忌证[14]。 本院从2020 年PRP 开展至2021 年6 月，共采集149例患者数据，采集仪器为血细胞分离机MCS＋和NGL XCF 3000，主要用于单采血小板采集。 2021 年6 月以后本院使用改良版NGL XCF 3000 以及配套耗材进行PRP 采集。 本试验从不同性别、年龄段、血小板计数段3 个方面出发，观测NGL XCF 3000 血细胞分离机在采集过程中的采集时间、循环血量，以及PRP 产品中白细胞、红细胞残存量和血小板计数值的数据并进行对比分析。

数据显示:256 例患者中，均未出现不适反应；仪器在采集不同性别、不同年龄段和不同血小板计数患者的采集时间、循环血量上均差异不明显(P＜0.05)；但随着年龄的增加PRP 产品中的白细胞含量随也随之增高，其中年龄较高组3(56～78 岁)白细胞残存量约高出年龄较低组1(18 ～40 岁)0.14×109/L，差异较为明显(P＜0.05)。 关于产品中白细胞、红细胞的含量在PRP 治疗中所起到的作用，目前还存在争议。 PRP 中白细胞有着趋化、吞噬和杀菌作用，清除局部坏死组织和病原体，增强抗感染的能力，加快组织的修复[15～16]。 中性粒细胞释放的嗜天青颗粒和特殊颗粒，前者能消化吞噬的细菌和异物(如组织碎片)，后者具有杀菌作用。 同时，中性粒细胞释放的花生四烯酸，在一系列反应后对调节血管口径和通透性有明显的作用，还能引起局部红肿、炎症反应和疼痛，对创伤愈合带来负面影响。 因而有研究认为，白细胞可能引起炎症、变态反应以及红肿和疼痛反应，不适用于肌腱病、慢性退行性关节炎等疾病的治疗[17]。而对于PRP 中红细胞，当红细胞被破坏时释放出的一些降解产物具有细胞毒性，最终会导致严重的组织损伤、局部血管收缩伴血管损伤和微循环功能障碍[18]。 同时红细胞的凋亡，也会触发巨噬细胞迁移抑制因子的释放，从而导致局部细胞功能障碍[19]。 因而高浓度的红细胞不利于组织修复；但红细胞有运送气体功能，运送的氧气有利于组织修复，运送的NO 有促进滑膜细胞凋亡作用[20]。

单采血小板的采集要求献血人员血小板计数值≥150×109/L，而PRP 的采集因采集量相对较少，一般≤100 mL，因而对于血小板计数在(100～150)×109/L 的患者我们也进行了PRP 采集。 针对患者血小板计数高低的差异，我们分了3个组，从PRP 产品来看，采集前血小板较低组[组1(100 ～150)×109/L]白细胞、红细胞残存量均明显(P＜0.05)高于其它血小板计数组，相较于组2、组3，其白细胞残存量约高出0.3×109/L，红细胞约高出0.06×1012/L，同时血小板计数也显著低于其它血小板计数组(P＜0.05)。 这可能是血小板计数较低在采集时，仪器需提高循环血量才能收集到足够血小板，因而PRP 产品中白细胞、红细胞残存量相对较高。 当患者血小板计数较高时，有利于血小板与其他细胞分离开来，单循环收集到的血小板提高，仪器循环数也会减少，血浆产量相对也减少，同时产品中白细胞、红细胞残存量相对较少，而血小板的浓度相对较高。 关于PRP 中血小板的浓度，国内专家共识推荐患者自身血小板浓度的4 ～8 倍或(500 ～1 000)×109/L。 本研究中PRP 中血小板浓度采用的4～8 倍全血浓度，血小板计数范围(500 ～1 500)×109/L。 因而采集前血细胞计数在(100～150)×109/L 的患者采集的PRP 产品血小板计数平均值为(844±187)×109/L 能满足临床治疗需求。 从2020—2022 年2 年多的临床实践来看，目前临床效果较为满意，没有收到不良反馈，这与相关研究结果较为一致[21]。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。