孙海英 范恩勇 焦玉东 许守广 沈楚铭(扬州市中心血站 扬州市输血研究所，江苏 扬州 225007)

胶体金免疫层析技术是1 种基于抗原与抗体特异性结合反应的快速检测方法，利用胶体金颗粒的特殊性和抗体的高度特异性，从而对待检标本中的目标分子进行定性或定量分析，因其具有操作简便、快速、灵敏度高、成本低等优势，被广泛应用于临床诊断、流行病学调查以及献血前的血液初筛中[1-2]，以快速检测标本中的病毒标志物。 乙型肝炎和梅毒作为我国目前常见的2 种传染病，也是经输血传播性疾病，为提高初筛检测的效率和准确性，降低检测成本和时间，大多数采供血机构普遍将乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B virus surface antigen，HBsAg)、梅毒螺旋体抗体(treponema pallidum antibody，抗-TP)列为初筛常规项目[3-4]，利用胶体金免疫层析技术进行快速初筛，对于保障献血者身体健康和控制经血传播疾病感染的风险具有重要意义。 本研究旨在对胶体金免疫层析法HBsAg 和抗-TP 项目用于献血者献血前快速初筛效果进行评价，并对ELISA 法HBsAg、抗-TP 反应性标本再次利用初筛试剂进行复检，然后对结果比对分析，从而切实提高初筛检测的效率和准确性，降低血液采集后的不合格率，确保血液质量和输血安全。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2020 年1 月1 日—2023 年6 月30 日在扬州市中心血站参加无偿献血的献血者血液标本，所有献血者均符合《血站技术操作规程》献血者健康检查中健康征询和体检的要求，年龄18～55 周岁，至少献血3 次以上，年龄可延长至60 周岁。 献血者相关信息采集自穿越安全输血标准化系统(Spring 2017，广东穿越医疗科技有限公司)和Liswell 实验室质量管理与控制系统(版本5.29，烟台海深威软件有限公司)。

1.2 试剂与仪器 HBsAg、抗-TP(胶体金免疫层析法)检测:HBsAg 试剂(艾博生物医药公司，批号:2022060042)，抗-TP试剂(英科新创公司，批号:202203A920)；HBsAg、抗-TP 检测(ELISA 法): HBsAg 试 剂 一(北 京 万 泰 公 司， 批 号:B20221045)， HBsAg 试 剂 二(英 科 新 创 公 司， 批 号:2022105130)， 抗-TP 剂 一( 北 京 万 泰 公 司， 批 号:N20221039)， 抗-TP 试 剂 二( 英 科 新 创 公 司， 批 号:2022107531)。 STAR 8CH 全自动加样仪、FAME24/20 全自动酶免分析仪(瑞士HAMILTON 公司)。

1.3 方法 献血前初筛使用胶体金免疫层析法，献血后检测使用ELISA 法，当日ELISA 法HBsAg 和抗-TP 检测为反应性的标本，在4h 内用与该反应性标本献血前初筛时同厂家、同批号的初筛试剂进行再次复检，用线性回归的方法计算ELISA 检测反应强度(S/CO 值)与初筛反应性判读时间(min)的回归方程。

1.4 统计学分析 采用Excel 2010 软件整理数据和绘图，使用SPSS 22.0 软件进行统计学处理，相关性采用线性回归分析，计数资料用百分率(%)表示，采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 献血前血液标本初筛结果 见表1。

表1 无偿献血者标本献血前胶体金法HBsAg、抗-TP 初筛结果(n，%)

2.2 献血后血液标本检测结果 见表2。

表2 无偿献血者标本献血后ELSIA 法HBsAg、抗-TP 检测结果(n，%)

2.3 ELISA 法HBsAg 反应性标本用初筛试剂的复检结果随着ELISA 法S/CO 值的升高，胶体金法复检为反应性的比例也逐渐升高，见表3。

表3 HBsAg ELISA 法检测不合格S/CO 值结果分布及再次胶体金法复检结果 (n，%)

2.4 ELISA 法抗-TP 反应性标本用初筛试剂的复检结果见表4。2.5

表4 抗-TP ELISA 法检测不合格S/CO 值结果分布及再次胶体金法复检结果 (n，%)

ELISA 法反应强度(S/CO 值)与胶体金法反应性判读时间的关系 对24 份HBsAg 与26 份TP 初筛试剂复检反应性标本，以结果判读时间(min)为横坐标，以其相对应ELISA法检测S/CO 值为纵坐标作图，经线性回归分析，HBsAg、TP胶体金反应性判读时间与ELISA 法S/CO 值的回归方程分别为:YHBsAg＝-0.904X＋34.508(R2＝0.9765)和YTP＝-1.1023X＋25.875(R2＝0.9825)，ELISA 法HBsAg、TP 检测S/CO 值反应强度与初筛反应性判读时间相关性见图1。

图1 ELISA 法HBsAg、TP 检测S/CO 值反应强度与初筛反应性判读时间相关性

3 讨论

近年来快速初筛检测技术因快速、准确、简便等优势，被广泛应用于临床诊断的各个领域[5-6]，基于胶体金免疫层析技术、磁性免疫层析技术、微流控技术、光学技术和电化学技术的初筛检测方法得到了更深入的研究[2，5]，采供血机构目前在献血人群中开展HBsAg 和TP 项目快速初筛检测，主要还是基于胶体金免疫层析技术[1，3]。

对献血者献血前初筛可以提高血液质量和采集后血液合格率，降低后续因不合格血液带来的采集、检测、成分制备、血液报废、血液报销等综合成本[7]。 本文结果显示献血前胶体金法初筛不合格占0.39%，献血后ELISA 检测不合格占0.51%。 尽管经过初筛，献血后HBsAg、TP 检测项目不合格占比仍然较高，主要与初筛所用试剂方法学、人员操作、环境温湿度、标本的溶血、脂血以及室内质量控制等因素有关[9-12]，这也是大多数采供血机构将HBsAg、TP 项目作为常规快速初筛的主要原因[8，13]。

ELISA 法检测反应性标本中，2/3 以上HBsAg 和TP 标本为双试剂反应性，假阳性的可能性较小[14-16]，ELISA 法HBsAg、TP 二检单试剂均较一检单试剂反应性率低(P＜0.05)，与不同厂家试剂灵敏度、特异性等有关[14]。 利用初筛试剂再次对62 份HBsAg 和61 份TP ELISA 法检测反应性标本进行复检，HBsAg 复检反应性仍有38.71%，TP 复检反应性仍有42.62%，说明在初筛检测中存在漏检现象，可能与初筛检测时的季节、环境、温湿度，观察时长、光线强弱、人员操作水平、缓冲液的有效使用以及标本的处理等多种因素[17-18]有关，特别是在ELISA 法S/CO 值(HBsAg)＜20.0、(TP)＜5.0时，再次复检观察时间均在18 min 以上才出现反应性。 实际团体采血工作中，由于献血人数较多，初筛工作人员结果判读时间可能会缩短，从而导致低浓度病毒标志物水平的标本初筛漏检。 HBsAg、TP 反应性标本ELISA 法反应强度(S/CO值)与初筛反应性判读时间呈负相关，S/CO 值越低初筛反应性判读时间越长，因此，通过有针对性的加强初筛工作人员培训和开展全面质量控制等措施，对于提高初筛检测的质量，降低漏检率，节约成本，有效提升血液采集后的合格率，还是能有一定比例的上升空间。

为能有效提高初筛HBsAg、Tp 试剂的检测效率和准确性，应严格按照试剂说明书要求条件进行试剂储存，初筛检测过程中，严格控制环境温湿度，温度较高、湿度较大的季节，尽可能即开即用，过多或过少的标本加样量均会导致结果出现偏差，全血标本需加缓冲液进行缓冲。 结果判读必须在规定时间内选择光线明亮处进行，时间太短，可能出现漏检，时间太长，超过规定时间，结果无效。 当团体采血时，初筛工作人员可根据当日采血计划，提前半小时做好初筛准备工作，如试剂准备、编号、试纸条粘贴、批号记录等，尽可能减少初筛前的准备工作时间，为保证初筛结果观察争取时间。目前，采供血机构尚缺乏对初筛试剂质量抽检与确认的统一评价标准，选择试剂厂家时，最好能提前对不同厂家试剂灵敏度、特异性和最低检出限等指标进行验证[1]，以达到最佳检测效果。

综合上述，在献血人群中开展胶体金免疫层析技术的乙肝和梅毒快速初筛项目，可有效提高血液质量和采集后血液合格率，工作人员的操作水平和检测质量直接关系到初筛检测效率和结果准确性，通过有针对性的加强初筛工作人员培训，可进一步提高初筛检测的质量，降低漏检率，节约成本，从而减少经血传播疾病感染的风险和保障献血者身体健康。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。