程汉波，刘加元，贾 波，张 鹏，邓思文，姚俊波，高瑞辉

前列腺癌是严重威胁男性生殖健康的恶性肿瘤，其发病率和病死率呈逐年上升趋势[1]。前列腺癌的临床治疗主要包括手术、化疗和激素等治疗，由于前列腺癌的早期临床诊断较困难，且发现多已为中晚期，患者的预后较差[2-3]。长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA, lncRNA)是在人体细胞内高度保守的非编码RNA，可能在前列腺癌的发生、发展中发挥癌基因或抑癌基因的功能[4-5]。lncRNA在前列腺癌组织中异常表达，下调或上调其表达可显著影响前列腺癌细胞的生长和侵袭[6-7]。lncRNA DNAH8-AS1由830个核苷酸连接构成，其在细胞中的功能尚未见报道。miR-186-5p在前列腺癌、膀胱癌、胃癌等组织中呈低表达，可显著抑制肿瘤细胞的增殖、化疗抵抗、侵袭等行为[8-10]。本文探讨lncRNA DNAH8-AS1在前列腺癌中的表达，分析其对前列腺癌细胞生物学行为的影响及对miR-186-5p的靶向调控作用，为前列腺癌的诊疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料前列腺癌细胞系PC-3、LNCaP、DU-145、C4-2B与正常前列腺上皮细胞RWPE-1组均购自中科院上海生科院细胞库。lncRNA DNAH8-AS1 siRNA(si-DNAH8-AS1组)、阴性对照siRNA(Control组)、miR-186-5p mimic、NC mimic、荧光素酶报告载体(Wt-DNAH8-AS1、Mut-DNAH8-AS1、Wt-YY1、Mut-YY1)，均购自上海吉玛制药公司。qRT-PCR试剂盒和TRIzol试剂盒，均购自美国Sigma公司。RPMI 1640培养基、胎牛血清、KSFM培养基，均购自美国Hyclone公司。MTT试剂盒购自上海生工生物公司；生物素标记的杂交探针购自广州锐博生物公司。转染试剂Lipofectamine 3000和Matrigel基质胶，均购自美国Invitrogen公司。双荧光素酶报告基因检测试剂盒和Transwell小室购自美国Promega公司。一抗MARK4、YAP、TAZ、α-Tubulin、YY1均购自美国BD公司。

1.2 细胞培养及转染用含10%胎牛血清的KSFM培养基培养RWPE-1细胞，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养PC-3、LNCaP、DU-145、C4-2B，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养。……