徐同欣，颜朝阳，路军涛，李晓旭，董稚明，郭 炜

食管癌是全球病死率较高的恶性肿瘤，根据病理类型可分为食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma， ESCC)和食管腺癌(esophageal adenocarcinoma， EAC)[1]。ESCC是我国食管癌的主要类型，约占食管癌的90%以上[2]。虽然ESCC的多学科治疗取得了一定进展，但与其他恶性肿瘤相比，ESCC患者的预后仍较差，5年总生存率不足30%[3-5]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是长度介于200～100 000 nt的无编码能力RNA。研究表明，lncRNA在ESCC等多种肿瘤发生、发展中起重要作用[6-8]。lncRNA NRSN2-AS1最早在卵巢癌中发现，可通过竞争性结合微小RNA(microRNA， miRNA)促进卵巢癌的进展，但其在ESCC中的作用和机制尚未完全阐明[9]。本文通过检测NRSN2-AS1在ESCC组织及细胞中的表达，探讨NRSN2-AS1过表达对Eca109细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响，旨在为ESCC的靶向治疗提供潜的分子靶点。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集2012年1月～2015年12月我院存档的96例ESCC手术切除标本，其中男性患者55例，女性患者41例。患者术前均未接受任何放、化疗，每例患者组织标本包括ESCC组织和癌旁正常组织(距原发灶边缘3～5 cm)。组织标本均经两位病理医师证实。本实验经我院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 细胞及主要试剂人类ESCC细胞系Eca109、TE1、TE13和KYSE150，由我院肿瘤研究所病理研究室保留并传代。TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；胎牛血清的RPMI 1640培养液购自美国Gibco公司；Lipofectamine 2000购自美国Thermo公司；反转录试剂盒、MTS试剂盒和双荧光素酶报告基因检测试剂盒，购自美国Promega公司；SYBR PCR Master Mix试剂，购自北京索莱宝公司；Transwell小室购自美国Corning公司；TOP-FLASH和FOP-FLASH质粒购自美国Millipore Corporation公司。本实验引物、NRSN2-AS1过表达质粒和miR-129-5p mimic，均购自于上海生工公司。

1.3 细胞培养及转染细胞系Eca109、TE1、TE13和KYSE150，均常规培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中，细胞培养条件为恒温37 ℃，CO2体积浓度为5%。……