◎ 孙 娜，燕如娟

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生化鉴定技术主要是根据不同种属的微生物其酶系统、代谢途径和代谢产物的较大差异，以及这些代谢产物的不同生化特征，从而对这些代谢产物加以生化测定进而鉴定微生物的种类。

1 生化鉴定原理方法及注意事项

1.1 革兰氏染色

1.1.1 革兰氏染色的原理

革兰氏染色是19世纪80年代由丹麦医师Gram创立，可用于鉴别革兰氏阴性菌与阳性菌，经革兰氏染色后的细菌可在镜下清楚观察到细菌的形态及结构特征，可用以细菌分类鉴定。①革兰氏阳性。革兰氏阳性菌细胞壁较厚，主要成分由肽聚糖相互交联而形成致密的网状结构。当细菌被结晶紫溶液染色后利用乙醇进行脱色时，细菌细胞壁的肽聚糖层因失水而导致孔径缩小以至关闭，使结晶紫与碘染色复合物无法脱色而被保留在胞内，呈现蓝紫色。②革兰氏阴性。革兰氏阴性菌细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，用乙醇进行脱色时，细胞壁中的脂类物质被乙醇溶解，增加了细胞壁的通透性，使得结晶紫与碘染色复合物易被乙醇抽出而脱色，随后被沙黄溶液复染着色，使细胞呈现红色。

1.1.2 操作方法

革兰氏染色法包括初染、媒染、脱色和复染等4个步骤。涂片后固定载玻片，加龙胆紫液染色10 s，水洗，甩干；加碘溶液染色10 s，水洗，甩干；加脱色液脱色10～20 s，水洗，甩干；加沙黄溶液复染 10 s，水洗；待干，镜检。

1.1.3 注意事项

①要确保使用的革兰氏染色试剂有效，并按照说明书进行试验。……