吴 倩，侯吉学，贺 强，崔晓宾，黄桂林，孙旭凌

结肠癌在我国的发病率与死亡率分别居于第3位和第5位[1]。目前，针对结肠癌的靶向治疗研究在临床上受到越来越多的重视[2-3]，关于结肠癌发病机制的研究得到广泛关注。研究[4]显示，在部分相关肿瘤的发生及发展中，细胞衰老扮演着重要角色。结肠癌细胞中存在一种属于组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶的组蛋白甲基化酶 SET结构域分支型1(SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1，SETDB1)，其编码基因的位置在人类染色体 1q21 上，其过度表达和下调广泛存在于多种恶性肿瘤中[5-7]，但具体机制仍有待进一步的研究。鉴于课题组前期研究发现SETDB1可以影响细胞衰老[8]，遂以结肠癌细胞为研究对象，拟进一步探讨SETDB1在结肠癌发生发展中的作用，为进一步阐明结肠癌发病机制和开发新的靶向治疗策略提供思路。

1 材料与方法

1.1 材料结肠癌细胞HT29、SW480由石河子大学医学院第一附属医院病理科提供；多柔比星(doxorubicin,DOX)购于德国Sigma公司；衰老β-半乳糖苷酶染色(SA-β-Gal)试剂盒、CCK8 试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司；转染试剂购于赛默飞世尔科技(中国)有限公司；p53和p21抗体、SETDB1和GAPDH购于美国圣克鲁斯生物技术(上海)有限公司；针对 SETDB1的 shRNA、过表达质粒与p53质粒购于上海吉凯基因化学技术有限公司；高糖培养基及嘌呤霉素等购于武汉启动子生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1稳转细胞系的建立 shRNA慢病毒用于感染预铺在6孔板中的SW480细胞(每孔约5×104个细胞)，首先5 μg/ml慢病毒感染细胞12 h，其次将培养基更换成高糖培养基。感染 72 h后，再将培养基更换为含2 μg/ml 嘌呤霉素的培养基。……