刘家茏，杨晓莉，张雪苗，杨小盼，魏从文

截至2019年，非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)在亚洲的总患病率已经超过29.62%[1]。 NAFLD与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的发生密切相关，每年罹患HCC的患者不断增多，使其一度成为全球癌症相关死亡的主要原因之一[2]。因此，寻找更有效的治疗方式或药物是解决NAFLD的主要手段。

肝脏处于病理状态时，其高尔基体蛋白73(golgi protein 73，GP73)往往会有较高的表达水平[3-4]，它能调控TGF-β1/Smad2信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移[5]，也具有辅助诊断低浓度甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)的潜力[6]。GP73可通过促进SCAP/SREBPs的表达，参与脂质代谢途径，调控肝细胞脂肪变性[7]，而NAFLD的发生与多种代谢综合征密不可分[8]。该研究通过饲喂蛋氨酸和胆碱缺乏(methionine-choline deficient，MCD)饮食，构建小鼠NAFLD模型，探讨GP73中和抗体在治疗NAFLD方面的价值。

1 材料与方法

1.1 实验动物SPF级C57BL/6小鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK 2016-0002。

1.2 试剂TriQuick Reagent 总RNA提取试剂(北京索莱宝科技有限公司)；改良油红O染色液(北京索莱宝科技有限公司)；EasyScript®One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix(北京全式金生物技术股份有限公司)；PerfectStart®Green qPCR SuperMix(北京全式金生物技术股份有限公司)；SREBP1一抗(英国Abcam公司)；GP73一抗(美国Santa Cruz公司)；α-SMA一抗(美国SAB公司)；α-Tubulin一抗(美国Proteintech公司)；GP73中和抗体(北京热景生物技术股份有限公司)。

1.3 仪器NanoDropTMLite 分光光度计(美国Thermo Fisher公司)；QuantStudioTM3 Real-Time PCR System(美国Thermo Fisher公司)；生物样品均质仪(杭州奥盛仪器有限公司)。

1.4 NAFLD模型的构建选择周龄性别一致的C57BL/6小鼠，其体质量情况和健康状况无明显差异，周龄6～8周。所有小鼠按照随机分配的方式被均分至模型组和对照组中，每组6只小鼠。模型组喂以MCD饮食，其中一组按照80 μg/2 d的规格尾部注射GP73中和抗体，另一组注射同体积IgG抗体(immunoglobulin G，IgG)。……