申雄成，蔡小军，董革辉，黄家恺，张晗祥，何 斌

骨质疏松症是一种慢性代谢性骨病，主要发生于绝经后妇女和老年人，严重威胁公众健康[1]。目前，预防和治疗骨质疏松的临床药物大部分副作用严重[2]。因此，有必要开发出有效且副作用较小的治疗骨质疏松症药物。近年来，多糖作为一种具有巨大结构多样性和广泛药理活性的生物大分子，在医药界引起了极大的关注[3]。最近研究显示铁皮石斛多糖(dendrobium officinale polysaccharides，DOP)抑制破骨细胞相关基因的表达，并抑制RANKL诱导的破骨细胞分化，表明其可能有助于成骨[4]。然而，DOP中确切的生物活性成分仍不清楚。因此，有必要对DOP进行系统研究，包括活性成分提取、纯化、结构表征和生物活性分析。该研究通过分离纯化DOP得到一种水溶性多糖(DOP-1-1)，并对其结构进行表征，然后体外研究其对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化作用。

1 材料与方法

1.1 材料与化学试剂铁皮石斛购自北京同仁堂(集团)有限责任公司；纤维素DEAE-52和Sephadex G-75购自美国GE Healthcare公司；17β-雌二醇(E2)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、FBS和α-MEM购自美国Gibco BRL公司。使用的所有其他试剂均为分析级。

1.2 石斛粗多糖的提取铁皮石斛原球茎 (15.0 kg) 用去离子水以1 ∶10的质量比浸泡6 h，并在90 ℃下提取3次，3 h/次。真空过滤后，合并所有提取物，浓缩，加入95%乙醇至终浓度70%沉淀，静置48 h。以2 000 r/min离心15 min后，获得沉淀并表示为石斛粗多糖。石斛粗多糖的多糖含量通过苯酚-硫酸法测定。

1.3 DOP-1-1的纯化、均一性和分子量测定将石斛粗多糖(1.2 kg)重新溶解在2 L去离子水中，然后移入分液漏斗中，将400 ml Sevag试剂[1-丁醇 ∶三氯甲烷(v/v)=1 ∶4]加入到分液漏斗中并剧烈摇晃。……