龙 珍 黄 毅 陈东华 梁荣中

(1 广西壮族自治区食品药品审评查验中心食品化妆品科，南宁市 530029，电子邮箱：404126527@qq.com；2广西中医药大学第一附属医院神经外科，南宁市 530022；广西壮族自治区民族医院3 药剂科,4 体检科，南宁市 530001)

随着老龄化的加剧，心血管疾病的发病率日益上升[1]。心肌梗死、心律失常、炎症及血流动力学负荷过大等因素均会引发慢性心力衰竭 (chronic heart failure,CHF)，而CHF具有发病率高、治愈难、易复发、病程长及致死率高等特征[2]。虽然近年来标准的抗心力衰竭治疗使患者的生存期得到明显延长，但其治疗效果仍欠佳[2]。目前，我国传统中医药在CHF治疗中的应用价值逐渐受到学者的重视，成为近年的研究热点之一。人参四逆颗粒由红参、附子、干姜、甘草组成，又称“回阳饮”，是中医回阳救逆的代表方剂，具有益气活血、温阳通络、养心复元的作用。有学者报告，人参四逆颗粒对犬心力衰竭模型具有较好的治疗效果[3]。但是，目前人参四逆颗粒治疗CHF的作用机制及其对机体神经内分泌的影响尚缺乏文献报告。因此，本研究拟探讨人参四逆颗粒对CHF模型大鼠心功能和神经内分泌因子的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物 9周龄清洁级雄性SD大鼠 90只，体重320～350(330.00±20.00)g，均购于辽宁生长生物技术有限公司(动物合格证号：SCXX-2005-0001)。所有大鼠均放置在广西中医药大学动物实验房进行7 d适应性喂养，饲养环境温度(22±2)℃，常规饲料喂养，自由饮水。按照随机数字表法取30只SD大鼠作为空白对照组，剩余60只SD大鼠用于建立CHF模型。

1.2 药物、试剂和仪器 盐酸阿霉素购自辉瑞制药(无锡)有限公司(国药准字：H20093251；规格：5 mL ∶10 mg)；人参四逆颗粒由吉林省中医中药研究院化学所提供(生产批号：20100601；规格：3.66 g生药/g生粉)。B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP；生产批号：20128186)、内皮素(生产批号：20183141)、血管紧张素Ⅰ(angiotensin Ⅰ，AngⅠ)(生产批号：20174361)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ) (生产批号：20143251)ELISA试剂盒均购自武汉碧云天生物科技有限公司。Vevo 2100型小动物高分辨率超声成像系统购自加拿大VisualSonics公司；iWorx动物多导生理记录仪购自美国iWorx公司；Vivid 7型心脏超声诊断仪购自GE公司。

1.3 建立CHF模型 采用盐酸阿霉素腹腔注射法[4]建立CHF模型。建模方法如下：采用灭菌注射用水配置浓度为0.8 mg/mL的阿霉素溶液，前3周按3 mg/kg的剂量腹腔注射，后3周按2 mg/kg的剂量腹腔注射，每周给药1次，连续给药6周。建模成功标准：建模完毕后继续喂养8周，采用Vivid 7型心脏超声诊断仪检测造模大鼠心功能，检测结果显示左室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)≤45%表示建模成功[5]。本研究中的60只大鼠均建模成功。

1.4 分组与给药 将成功建模的 60只大鼠按照随机数字表法分为模型组、给药组，每组30只。于建模成功后，给予空白对照组与模型组大鼠蒸馏水(10 mL/kg)灌胃，给予给药组大鼠中等剂量人参四逆颗粒灌胃，药物剂量参考《药理实验方法学》[6]中人与动物体表面积折算的等效剂量比率关系进行换算，最终确定中等药物剂量为0.5 g/kg。将药物溶于蒸馏水溶液，灌胃药物体积为1 mL/kg，2次/d，其间所有大鼠均进行常规饲养，自由饮水。连续给药21 d。

1.5 心功能指标的测定 连续给药21 d后，采用Vivid 7型心脏超声诊断仪测定大鼠的心功能水平，探头频率为11.4 MHz，图像深度调至2.0～4.0 cm。检查前腹腔注射10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)对大鼠进行常规麻醉，检查时先完成二维切面超声检查，并测量左室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD)、左室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter，LVESD)、左室舒张末期室间隔厚度(interventricular septal thickness，IVST)、左室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness，LVPWT)、左室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)、左室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume，LVESV)。根据公式计算LVEF，LVEF=(LVEDV-LVESV)/LVEDV×100%[7]。药物连续干预完毕后，测量大鼠体重；完成心功能指标的测定后，处死大鼠，迅速开胸取出心脏、肺脏；冰生理盐水洗净心脏，滤纸吸干后剪去左右心房和右心室，剩余部分即为左心室，称量左心室重量(left ventricular weight,LVW)。

1.6 神经内分泌因子水平的检测 完成心功能指标的测定后，取大鼠尾静脉血2 mL，迅速将血样进行离心(3 000 r/min，离心半径60 cm，离心时间10 min)分离血浆，密封后置于-80℃中冷存待检。采用ELISA法检测血浆BNP、内皮素、AngⅠ、AngⅡ水平，所有操作均严格按照说明书执行。

1.7 统计学分析 采用SPSS 22.0软件进行统计分析。计量资料以(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组大鼠心功能的比较 干预21 d后，给药组与模型组大鼠的IVST、LVPWT、LVESD、LVEDD、LVEDV均大于空白对照组大鼠，LVEF水平低于空白对照组，且模型组大鼠的LVW重于空白对照组大鼠(均P<0.05)；给药组大鼠的IVST、LVPWT、LVW、LVESD、LVEDV、LVEDD均小于模型组大鼠，LVEF水平高于模型组(均P<0.05)，见表1。

表1 3组大鼠心功能的比较(x±s)

2.2 3组大鼠的血浆神经内分泌因子水平的比较 给药组与模型组大鼠的血浆BNP、内皮素、AngⅠ、AngⅡ水平均高于空白对照组大鼠(均P<0.05)，而给药组大鼠的血浆BNP、内皮素、AngⅠ、AngⅡ水平均低于模型组大鼠(均P<0.05)。见表2。

表2 3组大鼠血浆神经内分泌因子水平的比较(x±s，ng/L)

3 讨 论

心力衰竭是常见的心血管疾病，其可引起心排血量相对或绝对不足，以致不能满足机体组织代谢需要，是各种心血管疾病最终的共同转归。目前西医治疗CHF的药物主要包括利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、AngⅡ受体拮抗剂、β受体阻断剂和醛固酮受体拮抗剂等，近年来新药的研究进展不大。人参四逆汤是经典方剂，具有回阳固脱的功效，人参四逆颗粒是由人参四逆汤提取，分离精制而成。研究表明，加味人参四逆汤可增加急性心肌梗死后心力衰竭大鼠的冠状动脉血流量，改善心肌供血，增强心肌收缩力，增加心输出量，从而改善大鼠心功能[5]。有学者报告，人参四逆颗粒可增加心力衰竭犬的心输出量，改善犬血流动力学指标[3]。本研究中，模型组大鼠的IVST、LVPWT、LVW、LVESD、LVEDD、LVEDV均大于空白对照组，LVEF水平均低于空白对照组(均P<0.05)，而给予人参四逆颗粒干预21 d后，给药组上述指标均优于模型组(均P<0.05)。这表明，人参四逆颗粒能改善CHF大鼠的心功能。

心力衰竭时，交感神经系统和肾素-血管紧张素系统被激活，儿茶酚胺、 AngⅡ和醛固酮等神经激素和细胞因子释放增多，进而损伤心血管系统；同时心肌和血管自身也能合成和分泌一些神经激素及细胞因子，例如去甲肾上腺素、 AngⅡ、 醛固酮、生长因子和炎症细胞因子等，以影响心肌和血管[8]。这些有生物活性的神经激素的过度表达可造成心肌损伤和循环功能受损[8]。BNP是一种由心肌细胞分泌的利尿钠肽的重要成员之一，是评估心功能的客观指标[9]。研究表明，CHF患者BNP水平表达越高，其预后越差；治疗期间BNP水平降低不明显，则发生各种并发症的概率增加[10]。内皮素1是目前已知的最强大的内源性缩血管物质，缺血缺氧导致血管内皮受损时，内皮素1的合成与释放增加[11-12]。心力衰竭发生后，内皮素1的水平升高，进一步引起心肌及血管收缩、重构[12]。本研究结果显示，模型组大鼠的血浆BNP、内皮素、AngⅠ、AngⅡ水平均高于空白对照组(均P<0.05)，而给药组大鼠的上述指标水平均低于模型组大鼠(均P<0.05)。这表明，心力衰竭大鼠的神经内分泌细胞因子水平异常升高，而人参四逆颗粒可降低CHF大鼠的神经内分泌细胞因子水平，这可能是其治疗CHF的重要机制之一。

综上所述，人参四逆颗粒能改善CHF大鼠的心脏功能，其或通过降低神经内分泌细胞因子水平而发挥治疗CHF作用，但其临床应用价值仍需进一步探讨。