褚云香 王东盛 贾志伟 金 麟 刘晓川

(应急总医院消化内科，北京市 100028，电子邮箱：xwt998112@163.com)

胃癌是一种起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，好发于50岁以上人群，能发生在胃的任何部位，多数患者发生在胃窦部、胃大弯、胃小弯等[1]。胃癌病因复杂，目前普遍认为与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染、地域环境及饮食因素等有关，而在上述原因中H.pylori感染占比较高[2]。研究表明，我国胃癌高发地区成人H.pylori感染率在60.0%以上，主要是由于持续的H.pylori感染能促使体内的硝酸盐转化成具有致癌作用的亚硝酸盐和亚硝胺等[3]。同时，H.pylori感染还能引起胃黏膜慢性炎症，加剧黏膜上皮细胞过度增殖[4]；此外，H.pylori的毒性产物CagA、VacA等也具有明显的促癌作用[5]。晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGE)是蛋白质、氨基酸、脂类、核酸等物质的游离氨基，与还原糖的羰基经过缩合、重排、裂解等一系列反应后产生的小骨窗的终末产物，能与氨基酸集团形成稳定的交联结构，不易被酶降解[6]。临床研究表明，AGE与肿瘤的发生、发展有关，能直接参与肿瘤的发生和生物学行为[7]，但关于其对患者预后影响的研究较少。本研究探讨AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中的表达水平及其与患者预后的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2015年1月至2019年1月我院收治的87例H.pylori感染所致胃癌患者作为研究对象。纳入标准：(1)均符合H.pylori感染所致胃癌诊断标准[8]，均经过手术病理组织检查确诊；(2)均行手术治疗，手术过程中取病灶组织及癌旁组织；(3)均完成AGE测定。排除标准：(1)合并精神异常、血液系统疾病、器质性疾病者；(2)凝血异常或伴有自身免疫系统疾病者；(3)合并其他部位恶性肿瘤、严重损伤患者。其中男性45例，女性42例；年龄35～78(53.26±6.78)岁；病灶直径4～9(6.15±1.12)cm；肿瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期47例，Ⅲ～Ⅳ期40例；Lauren分型：肠型33例，弥漫型54例；分化类型：低分化31例，中分化30例，高分化26例；淋巴结转移：转移37例，未转移50例；浸润深度：T1～T2期48例，T3～T4期39例。本研究获得本院医学伦理委员会批准实施，所有患者及家属均对本研究知情并签署同意书。

1.2 标本采集及检测方法

1.2.1 标本的处理及AGE测定：所有患者均在术中分别取病灶组织、癌旁组织(距离病灶≥3 cm)3～5 g，采用免疫组织化学法检测病灶组织及癌旁组织中AGE蛋白表达阳性率。向制备好的切片中加入浓度为3%的甲醇双氧水，持续处理10 min，封闭内源性过氧化物酶，磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline，PBS)连续洗涤3次，5 min/次；加入PBS调整溶液pH值为6.0，加入柠檬酸盐缓冲液5 mL，缓慢加热至80℃，完成缺损蛋白修复;向标本中加入山羊血清(南京生航生物技术有限公司，生产批号：20175715)3 mL封闭20 min，加入AGE蛋白一抗(北京中杉金桥生物技术有限公司，生产批号：20197535；抗体稀释倍数1 ∶8)5 mL孵育20 min，PBS洗涤后缓慢加热至100℃，并加入AGE蛋白二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司，生产批号：20194715；抗体稀释倍数1 ∶10)，在湿盒内孵育30 min，37℃下加入PBS洗涤3次，2 min/次，利用二氨基联苯胺显色后在显微镜(Olympus公司)下拍照[9]。

1.2.2 阳性细胞判断标准：将切片置于倒置显微镜下，观察结构完整、清晰且定位较为明确的细胞。细胞浆内呈棕黄色，且颜色明显高于背景为阳性细胞[10]。

1.3 观察指标 (1)AGE的表达阳性率。查阅患者病例资料，记录不同性别、年龄、肿瘤大小、分化类型、肿瘤分期、淋巴结转移、浸润深度、Lauren分型的患者的病灶组织AGE表达阳性率。(2)AGE与患者预后的相关性。术后对患者进行12个月的随访，随访方式包括门诊随访、电话随访及上门随访，每1～3个月随访1次，计算病灶组织AGE表达阳性患者与病灶组织AGE表达阴性患者的生存期，分析AGE与患者生存期的相关性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计数资料以例数和百分比表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以(x±s)表示，组间比较采用成组设计两样本t检验，组内比较采用配对t检验；采用Kaplan-Meier法进行生存分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 AGE蛋白在胃癌病灶组织及癌旁组织中表达阳性率的比较H.pylori感染所致胃癌患者病灶组织的AGE蛋白表达阳性率为55.17%(48/87)，高于癌旁组织的4.60%(4/87)(χ2=53.100，P<0.001)。免疫组织化学结果显示，AGE蛋白在H.pylori感染所致胃癌患者的病灶组织中呈棕黄色，颜色相对较深，而在癌旁组织中颜色较浅或不表达。见表1和图1。

图1 AGE蛋白在胃癌不同组织中的表达(免疫组化染色，×200)

2.2 不同临床病理特征的H.pylori感染所致胃癌患者病灶组织中AGE表达阳性率的比较H.pylori感染所致胃癌患者病灶组织中，AGE蛋白表达阳性率与性别、年龄、浸润深度、Lauren分型均无关(均P>0.05)，而与肿瘤大小、分化类型、肿瘤分期、淋巴结转移有关(均P<0.05)，肿瘤直径≥5 cm、低中分化型、肿瘤Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴转移的患者病灶组织中AGE表达阳性率更高，见表1。

表1 不同临床病理特征的H. pylori感染所致胃癌患者病灶组织中AGE表达阳性率的比较[n(%)]

2.3 AGE的表达情况与患者预后的相关性 术后随访12个月，病灶组织中AGE蛋白表达阳性的H.pylori感染所致胃癌患者的中位生存期为7个月，短于AGE蛋白表达阴性患者的中位生存期11个月(χ2=10.592，P=0.015)，生存曲线见图2。

图2 H. pylori感染所致胃癌患者的生存曲线

3 讨 论

胃癌是临床上常见的恶性肿瘤，具有发病率高、复发率高等特点[11]。目前，胃癌的病因尚未完全阐明，普遍认为与H.pylori感染有关。胃癌发病早期缺乏典型性临床症状，随着病情进展，患者会出现食欲下降、乏力及上腹疼痛加重等症状，肿瘤破坏血管可引起呕血、黑便等消化道症状，严重影响患者的身体健康和生活质量[12]。因此，加强对H.pylori感染所致胃癌患者的治疗和干预对改善患者预后具有重要意义。

本研究中，H.pylori感染所致胃癌患者病灶组织中的AGE蛋白表达阳性率为55.17%，高于癌旁组织的4.60%(P<0.05)，说明AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中的病灶组织呈高表达水平，或许直接参与胃癌的发生、发展。有研究表明，AGE能积累在体内不同的器官及细胞中，如晶状体、肝脏、血管内皮细胞及神经细胞等，当AGE积累过量时，会影响机体组织器官及细胞的正常功能，产生一系列病理反应[13]。还有研究表明，AGE直接参与糖尿病、尿毒症、动脉粥样硬化等疾病的发生，但其在胃癌中的研究较少[14]。本研究中，H.pylori感染所致胃癌患者病灶组织中AGE蛋白表达阳性率与肿瘤大小、分化类型、肿瘤分期、淋巴结转移有关(均P<0.05)，其中肿瘤直径≥5 cm、低中分化型、肿瘤Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴转移的患者病灶组织中AGE表达阳性率更高，说明AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中表达异常，其在病灶组织中的表达水平能反映患者疾病的严重程度。研究表明，AGE受体为清道夫受体，与炎性反应具有较大关联，能直接参与肿瘤的发生和发展[15]。还有研究表明，AGE能与高迁移率族蛋白B1相互结合，直接参与胃癌的发生和发展[16]，主要是由于AGE能通过高迁移率族蛋白B1-AGE通路，促进肿瘤细胞的生长和增殖，从而抑制肿瘤细胞凋亡[17]。本研究进一步分析AGE的表达情况与H.pylori感染所致胃癌患者预后的关系，结果显示，病灶组织中AGE蛋白表达阳性患者的生存期短于AGE蛋白表达阴性患者(P<0.05)，这提示H.pylori感染所致胃癌患者的预后与病灶组织中AGE的表达情况相关。因此，H.pylori感染所致胃癌患者治疗过程中应加强AGE蛋白水平的测定，并根据测定结果调整治疗方案，使得患者的治疗更具科学性。

综上所述，AGE在H.pylori感染所致胃癌患者的病灶组织中呈高表达水平，其表达水平能反映患者的疾病严重程度，且与患者预后相关，临床上应加强AGE的检测以评估患者预后。