宋述卫

【摘要】目的：对比研究同视野下荧光染色法和氢氧化钾湿片法在诊断浅部真菌感染中的敏感度。方法：选取2019年1月—2021年6月间我院收治的浅部真菌感染患者200例作为研究对象，取材后分两份，分别采用荧光染色法和氢氧化钾湿片法进行诊断，比较两种方法下患者的诊断敏感度。结果：比较荧光染色法和氢氧化钾湿片法诊断不同类型浅部真菌感染的敏感性，均有荧光染色法优于氢氧化钾湿片法的情况，二者总的诊断敏感性分别为98.00%、91.50%，前者显著高于后者，比较有统计学差异（P<0.05）。结论：在浅部真菌感染的诊断中，荧光染色法相较于氢氧化钾湿片法有更好的敏感性，适合临床推广应用。

【关键词】荧光染色法；氢氧化钾湿片法；浅部真菌感染；敏感度

Comparison of sensitivity between fluorescence staining method and potassium hydroxide wet sheet method in the diagnosis of superficial fungal infection under the same visual field

SONG Shuwei

Department of Dermatology， Jingmen Second People’s Hospital， Jingmen， Hubei 448000， China

【Abstract】Objective： To compare the sensitivity of fluorescence staining method and potassium hydroxide wet sheet method in the diagnosis of superficial fungal infection under the same visual field.Methods：200 patients with superficial fungal infection from January 2019 to June 2021 in our hospital were selected as the research subjects.Then the samples were divided into two parts and diagnosed by fluorescence staining method and potassium hydroxide wet sheet method to compare the diagnostic sensitivity of patients under the two methods.Results：The sensitivity of fluorescence staining method and potassium hydroxide wet sheet method in the diagnosis of different types of superficial fungal infection was compared，and the fluorescence staining method was better than the potassium hydroxide wet sheet method.The total diagnostic sensitivity of the two methods were 98.00% and 91.50%，respectively，the former was significantly higher than the latter，with a statistical difference（P<0.05）.Conclusion：In the diagnosis of superficial fungal infection，fluorescent staining method has better sensitive than potassium hydroxide wet sheet method，which is suitable for clinical application.

【Key Words】Fluorescent staining method； Potassium hydroxide wet sheet method； Superficial fungal infection； Sensitivity

皮膚浅部真菌感染属于常见的皮肤病类型，最常见的致病菌包括马拉色菌、皮肤癣菌、念珠菌等，这些真菌侵犯患者皮肤、毛发、指（趾）甲的情况下，可诱发头癣、手足癣、体股癣、甲真菌病、花斑糠疹、皮肤黏膜念珠菌病以及一些难以辨认的皮肤癣[1]，而因上述真菌感染具有极强的传染性，不仅容易发生交叉感染，而且治愈后的复发率高[2]，严重影响患者的正常工作与生活。因而，对其进行及时的明确诊断，有利于患者治疗方案的选择和早期康复。临床诊断浅部真菌感染的主要方法是真菌培养法、直接镜检法，前者因病原菌的培养周期长，影响患者的及时诊断与治疗，应用限制较大，而后者最常用的就是氢氧化钾湿片法与荧光染色法，两者在浅部真菌感染的诊断中均有其相应的优势。本文将选取2019年1月—2021年6月间我院收治的浅部真菌感染患者200例作为研究对象，旨在对比研究同视野下荧光染色法和氢氧化钾湿片法诊断浅部真菌感染的敏感性。报道如下。

1.1 一般资料

选取2019年1月—2021年6月间我院收治的浅部真菌感染患者200例作为研究对象，患者均有浅部真菌感染的典型临床表现，且符合浅部真菌感染的临床诊断标准，经最终临床诊断确诊。参与研究的所有患者在短期内均无局部或全身抗真菌药使用史。患者中，男111例，女89例，年龄35～50岁，平均年龄（42.1±4.5）岁，患者的患病类型分布为：头癣12例、手足癣78例、体股癣65例、甲真菌病15例、花斑糠疹30例。

1.2 方法

结合患者的病情选择合适的皮损位置（选择皮屑、甲屑或者断发发根等易检出致病菌的位置），使用75%的酒精消毒处理后，获取检验标本。其中，头癣患者选择在断发发根处取材，以镊子拔取；手足癣、体股癣以及花斑糠疹的患者一般选择在皮屑处取材，使用钝头刀对皮损炎性活动处的边缘鳞屑进行刮取；甲真菌病患者则在甲屑处取材，先将表层碎甲屑清理之后，再于接近正常甲组织的甲下刮取碎屑。将获得的同一个患者的检验标本分为两份，均置于水平载玻片的中心位置。其中一份用荧光染色法进行检验，在玻片上滴加荧光染色液后，静置0.5～2min，盖上盖玻片，将气泡挤出铺匀，染色数秒后，将多余染液吸除，于显微镜下进行检测。检测时，先在不开荧光的情况下，以10倍物镜对真菌视野进行寻找，再以40倍物镜进行观察，确定真菌菌丝或孢子结构的存在后，拍照存档。然后将荧光打开，再次寻找并确认菌丝孢子，于同视野下拍照存档。另一份采用氢氧化钾湿片法进行检验，在玻片上滴加氢氧化钾溶液，盖上盖玻片，将气泡挤出铺匀，使用酒精灯加热数秒但不能沸腾，再次轻压盖玻片碾磨，在同一显微镜相同视野下对真菌菌丝或孢子结构进行寻找观察和确认。

1.3 观察指标

分别比较两种方法下不同病种患者的诊断敏感度以及总的敏感性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（χ±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

比较荧光染色法和氢氧化钾湿片法诊断不同类型浅部真菌感染的敏感性，均有荧光染色法优于氢氧化钾湿片法的情况，二者总的诊断敏感性分别为98.00%、91.50%，前者显著高于后者，比较有统计学差异（P<0.05），见表1。

流行病学调查结果显示，在我国，浅部真菌感染具有极高的发病率，在各地的皮肤科门诊中，因浅部真菌感染就诊的患者数量在所有皮肤疾病中高居第二或第三位，在部分季节或者部分地区，其患病率更是高居皮肤科门诊第一位[3]，因而做好疾病的诊断工作具有极其重要的意义。本文研究的两种诊断方法，荧光染色法和氢氧化钾湿片法都有操作简单、经济性好、无需特殊仪器辅助的优点，但是氢氧化钾湿片法诊断过程中，其镜下视野内，背景相对杂乱，与真菌菌丝、孢子的色泽以及亮度并没有太大的区分，无法在真菌结构突出的情况下来对结果进行判读。需要操作人员对视野层面进行不断调整寻找方可做出判断，尤其是经验不足的操作人员，判读时间长，准确性也比较低，当视野中存在脂滴或者菌丝、孢子的量比较少的情况下，漏检率极高。而荧光染色法主要是通過荧光物质中的荧光素与真菌细胞壁几丁质等多糖发生特异性结合，并在特定波段的紫外光的激发下，使菌丝和孢子发出蓝绿色荧光，并使其与背景、杂志等进行有效区分[4-5]，进而对真菌感染情况进行判断的一种方法，这种方法弥补了氢氧化钾湿片法的不足，并且反应时间短、检测的效率高。徐瑾等的研究对比了两种方法的平均阅片时间，氢氧化钾湿片法为102s，荧光染色法仅为29s，优势显著。从两种方法的诊断敏感性来看，无论是不同病种单独诊断的敏感性还是总的敏感性，都有荧光染色法显著高于氢氧化钾湿片法的情况，更适合临床推广应用。需要注意的是，荧光染色法应用过程中，会对标本或者玻片上存在的少量纤维进行染色，不加注意的情况下，可能对结果造成影响，但植物纤维与真菌的结构存在较大差异，只要判读中更加谨慎细致，即可避免植物纤维的影响[6-7]。

参考文献

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[2] 于波.荧光染色法与KOH湿片法在皮肤浅部真菌感染检查中的效果比较[J].皮肤病与性病2020，42（4）：580-591.

[3] 杨颜龙，张素敏，易松柏，等.荧光染色法和氢氧化钾湿片法在诊断浅部真菌感染中的敏感度比较[J].中国麻风皮肤病杂志，2019，35（7）：389-390.

[4] 徐瑾，何咏，黄玲珍，等.荧光染色法双重荧光染色法与KOH湿片法在甲真菌诊断中的比较研究[J].中国真菌学杂志，2020，15（3）：167-168.

[5] 王瑶，孙宏莉，赵颖，等.自动化镜检结合人工智能分析系统对阴道分泌物革兰氏染色涂片形态学的准确性评价[J].协和医学杂志，2021，12（4）：503-509.

[6] 卢玲.贺兰山大型真菌子实体形态多样性及特定菌种培养特性研究[D].呼和浩特：内蒙古农业大学，2020.

[7] 杜震，乔庐东，平浩，等.上尿路结石治疗中合并真菌感染患者的临床特点和治疗策略[J].中华泌尿外科杂志，2020（4）：272-276.