周艳艳 张俊明 郑国安 黎砚书 吴金花 丁琦

摘要：目的：评价碳酸氢钠注射液的安全性，为临床安全用药提供依据。方法：用血管刺激性试验、体外溶血试验、全身主动过敏性试验（ active systemic anaphylaxis，ASA） 和被动皮肤过敏试验（ pas- sive cutaneous anaphylaxis，PCA） ，考察碳酸氢钠注射液的安全性。结果：碳酸氢钠注射液对新西兰兔静脉滴注部位血管无刺激性作用;碳酸氢钠注射液对实验兔的股四头肌具有轻度刺激性;体外溶血试验中，无溶血和凝集反应;豚鼠全身主动过敏性试验与被动皮肤过敏试验均为阴性。结论：该实验条件下，碳酸氢钠注射液用于静脉注射是安全可靠的。

关键词：碳酸氢钠注射液;刺激性试验;溶血性试验;过敏性反应;安全性评价

【中图分类号】  F763【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）14--02

ABSTRACT， Objective： To evaluate the safety of Sodium bicarbonate injection and provide evidence for its safe clinical use. METHODS： Vascular stimulation test， hemolysis test in vitro， active systemic anaphylaxis （Asa） and Passive Cutaneous Anaphylaxis （PCA） were used to evaluate the safety of Sodium bicarbonate injection. Results： Sodium bicarbonate injection showed no vascular irritation at the intravenous drip site in New Zealand rabbits， Sodium bicarbonate injection showed mild irritation to quadriceps femoris muscle in experimental rabbits， and hemolysis and agglutination were not observed in vitro The whole body active allergy test and passive skin allergy test were negative in Guinea pigs. Conclusion Under these experimental conditions， Sodium bicarbonate injection is safe and reliable for intravenous use.

Keywords： Sodium bicarbonate injection; stimulation test; hemolytic test; allergic reaction;  safety evaluation

碳酸氢钠注射液主要成分均是碳酸氢钠，是一种用于治疗代谢性酸中毒的注射剂，对于轻至中度的代谢性酸中毒，口服给予，只有在重度代谢性酸中毒时选择静脉滴注，纠正酸中毒[1]。碳酸氢钠注射液的安全性试验作者未见相关报道为确保临床用药安全，需要从毒理学研究的角度对制剂进行评价。本研究按照国家食品药品监督管理总局颁布的指导原则[2]有安全性试验项目要求，在药品非临床研究质量管理规范（good laboratory practice of drug，GLP）条件下，对碳酸氢钠注射液进行了血管刺激性试验、肌肉刺激性试验、体外溶血性试验、全身主动过敏性试验（ active systemic anaphylaxis，ASA） 和被动皮肤过敏试验 （ passive cutaneous anaphylaxis，PCA） ，验证其安全性，为其临床安全用药提供参考依据。

1仪器与材料

1.1仪器

莱卡TP1020脱水机、莱卡HI1210摊片机、莱卡HI1220烘片机、莱卡RM2126轮转式切片机（均为德国 Leica 仪器有限公司）TKD-BMC石蜡包埋机（孝感泰康达医疗设备有限公司）;MOTIC BA300生物显微镜（Motic China Group Co）

1.2 药品与试剂

碳酸氢钠注射液（回音必集团江西东亚制药有限公司，批号：2018122621，规格：250ml：12.5g）;碳酸氢钠注射液原研药品（大塚制药株式会社（日本），批号：K8B78）0.9%氯化钠注射液（江西科伦药业有限公司，批号：C18052204-2）;卵白蛋白（sigma公司，批号：SLBQ9036V）;伊文思蓝（上海源叶生物科技有限公司，批号：L04J9J62864）。

1.3 实验动物

普通级新西兰兔，普通级，体质量 2.0～2.5 kg，雌雄各半; 普通级 Hartley 豚鼠，体质量 300～400g，雌雄各半;均由長沙市天勤生物技术有限公司提供，生产许可证SCXK（湘）2014-0010;SPF级SD大鼠，体质量为均值的20%，雌雄各半，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（湘）2016-0002。由江西省药物研究所安全评价中心动物房饲养，实验动物使用许可证号 SYXK（赣） 2018-0008，适应性饲养7d后进行实验。

2方法[3-4]

2.1血管刺激性试验

取检疫合格试验兔8只，雌雄各半，分为供试品组和原研药品对照组，4只/组，雌雄各半，采用自身对比法，供试品组左侧耳缘静脉给予碳酸氢钠注射液，原研药品组左侧给予碳酸氢钠注射液原研药，给药浓度为50mg/mL，5ml/kg，右侧耳缘静脉都给予同体积的0.9%氯化钠注射液。1次/d，连续7d，每次给药前和末次给药后72h肉眼观察注射部位的局部反应，是否有红斑、水肿、充血等反应。末次药后72 h每组各取2 只动物进行安乐死，肉眼观察注射局部毒性反应，解剖取材，以耳缘静脉注射部位为中心，对耳血管远心段、给药部位和近心段3个部位进行取材，剩余动物继续观察 14 d后同法取材进行肉眼和病理组织学检查，以观察刺激反应的可逆程度。取材组织用4%甲醛溶液固定，后，进行常规的取材、石腊包埋，用切片机制备 2～3 μm厚切片，苏木素伊红染色，显微镜下进行组织病理学检查。

2.2 肌肉刺激性试验

取检疫合格试验兔8只，雌雄各半，分为供试品组和原研药品对照组，4只/组，雌雄各半，采用自身对比法，供试品组左侧股四头肌给予碳酸氢钠注射液，原研药品组左侧给予碳酸氢钠注射液原研药，给药浓度为50mg/mL，0.5ml/只，右侧股四头肌都给予同体积的0.9%氯化钠注射液。1次/d，连续7d，每次给药前和末次给药后72h肉眼观察注射部位的局部反应，是否有充血、坏死等反应。末次药后72 h每组各取2 只动物进行安乐死，肉眼观察注射局部毒性反应，解剖取材，对注射部位进行取材，剩余动物继续观察 14 d后同法取材进行肉眼和病理组织学检查，以观察刺激反应的可逆程度。取材组织用4%甲醛溶液固定后，进行常规的取材、石腊包埋，用切片机制备 2～3 μm厚切片，苏木素伊红染色，显微镜下进行组织病理学检查。

2.3 溶血试验

2.3.1 红细胞血液制备 实验兔心脏采血10mL，采集的血液放入含玻璃珠的三角烧瓶中，振摇10min，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，分别取 4 mL 移入 2 支刻度离心管中，加入约 10 倍量的生理盐水，摇匀后分装至离心管，1 500 r/min 离心 15 min，除去上清液，沉淀的红细胞用生理盐水按 上述方法再洗涤 3次，上清液不显红色。将所得红 细胞用生理盐水稀释成 2%的混悬液备用。

2.3.2 加样观察 取洁净试管进行编号，1～5 号管 为碳酸氢钠注射液管，6～10号管 为碳酸氢钠注射液原研药品管，11号管为阴性对照管（生理盐水），12号管为阳性对照管（灭菌 注射用水）。按照表 1 顺序加入各种溶液，轻轻摇匀后，立即置（37±0.5）℃的恒温培养箱中温育。每隔 15 min 观察 1 次，1 h 后每隔 1 h 观察 1 次，观察 3 h。

2.3.3 结果判断 ①溶血：溶液呈澄明红色，管底无红细胞残留或有少量红细胞残留。②无溶血：

红细胞全部下沉，上清液体无色澄明。③红细胞凝聚：溶血中棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后

不分散。 4如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。

2.4 主动全身过敏试验（ ASA）

2.4.1 致敏 取检疫合格的 40只 Hartley 豚鼠按照体质量以随机分组方法分为 5组：供试品高（50mg/mL）和低剂量组（25mg/mL）、原研药品组（50mg/mL）、阳性对照（卵白蛋白）组和阴性对照（0.9%氯化钠注射液），每组 8 只，雌雄各半。分别腹腔注射相应药物进行致敏，1 mL/只，隔日 1 次，共致敏3 次。

2.4.2 激发 末次致敏后第 14 和 21 天，分别按照 2 倍的致敏剂量，各组动物快速静脉对注射相应药物进行激，每次激发一半动物。激发后立刻观察 30 min， 并按表2 观察症状、判断过敏反应程度。

2.5被动皮肤过敏试验（ PCA）

2.5.1致敏血清的制备

取大鼠10只，随机分为随机分为供试品高（50mg/mL）和低剂量组（25mg/mL）、原研药品组（50mg/mL）、阳性对照（卵白蛋白）组和阴性对照（0.9%氯化钠注射液），每组2只，雌雄各半。致敏佐剂采用4 %氢氧化铝凝胶，将药物溶液与佐剂等比例混合后皮下注射，给药容积为1 mL/只，隔日1次，共致敏3次。末次致敏后第10天，腹主动脉采血，2000 r/min 离心10 min，分离血清，将相同组别大鼠的血清混合。

2.5.2 PCA致敏

用0.9 %氯化钠注射液将上述各组致敏血清稀释成不同的倍数（原液、1：2、1：8、1：32）。另取检疫合格大鼠40只，随机分为上述5组，每组8只，背部选取背中线脊柱 两侧对应的4个点，剪掉被毛，皮内注射4个不同 浓度的抗血清，0.1 mL/点，进行被动致敏。

2.5.3 PCA激发

被动致敏48h后，每只大鼠静脉注射0.5mL抗原加等量的1%伊文思蓝染料进行激发。激发后30min家各组分别尾静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原（0.5ml）加共1ml/只进行激发。安乐死大鼠，剪开背部皮肤，测量皮肤内层注射点的蓝斑大小，如蓝斑直径大于5 mm 则皮肤过敏反应为阳性。

3 结果

3.1血管刺激性试验

供试品组和原研药品对照组给药前及恢复期给药局部血管均清晰，未见血管扩张、收缩及淤血等症状，血管周围组织亦无水肿等。末次给药结束约 72 h 和 14 d 恢复期结束后，肉眼观察未见异常。显微镜下检查显示，停药后72h兩组动物的两侧给药部位血管内均可见血栓形成，考虑为机械性损失所致。各组动物两侧耳缘部真均可见炎症细胞浸润，炎症反应相似，表明该反应为非特异性病理改变，与供试品刺激无关，与阴性对照组比较无明显差异。

3.2肌肉刺激性试验

全部动物在试验期间给药部位均未见明显异常情况。组织病理学检查，停药后72h供试品2只动物和原研对照1只动物均出现动物出现纤维变性，炎性细胞浸润;0.9%氯化钠注射液有1只动物出现纤维变性，炎性细胞浸润，其他动物未见明显组织病理学改变。恢复14d，供试品和原研对照均有1只动物均出现动物出现纤维变性，炎性细胞浸润、1只动物出现少量炎性细胞浸润;0.9%氯化钠注射液均为见明显组织病理学改变，提示供试品及原研药品均对实验兔肌肉具有轻度刺激性，且继续观察14d后不能恢复。

3.3溶血性试验

12 号管加入纯化水后于 15 min 出现澄明红色，表明已经溶血;前几个观察时点，1～11号管溶液呈混浊状态，未见澄明红色或棕红色现象;随着观察时间延长，红细胞开始下沉，3 h 后全部下沉，轻摇各管红细胞散开。与 11号管比较，1～10号管未见明显异常，未见红细胞凝聚现象。与 7 号管比较，1 ～11号管有明显差异。本品和原研对照均无溶血和致红细胞凝聚现象发生。

3.4 主动全身过敏性试验

阳性对照组豚鼠激发后即刻出现搔鼻、呼吸急促、排尿、呼吸困难、步态不稳、哮鸣音、喘息、旋转、潮式呼吸、死亡等极强阳性过敏反应，均在5min内死亡。供试品组、原研药品对照组和阴性对照组均未见过敏反应症状，与阴性对照组比较，供试品组和上市药物对照组豚鼠均未见明显差异，按全身致敏性评价标准评判为阴性，表明供试品和原研药品对对豚鼠无主动全身过敏性反应。

3.5被动皮肤过敏试验

供试品组、原研药品对照组和阴性对照组的各血清稀释度均未见阳性蓝斑，按要求均为阴性，致敏率均为0%，阳性对照组激发后不同的稀释度注射部位出现明显的蓝斑，致敏率达到100%，提示供试品及原研药品对大鼠无被动皮肤过敏性反应，结果见表3，图1。

4 讨论

碳酸氢钠注射液为临床用来调节酸碱平衡的常用基本药物，静脉输入可治疗代谢性酸中毒，碱化尿液，治疗胃酸过多引起的症状，并具有预防急性肾损伤的作用[5]。碳酸氢钠注射液处方及制备工艺相对简单，其发挥作用快，在临床上的应用越来越广泛。注射药物的安全性评价是药物临床试验的重要研究内容[6-7]。药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质（如 pH、渗透压等）均有可能引起局部毒性或过敏性反应，由于药物本身的原因，在生产、贮存和临床使用过程中易出现药液不稳定等情况[8]。本研究通过血管刺激性、肌肉刺激性、体外溶血、主动全身过敏性（ASA）和被动皮肤过敏试验性（PCA），验证碳酸氢钠注射液的安全性，结果表明碳酸氢钠注射液对实验兔兔静脉滴注部位血管無刺激性作用;体外溶血试验中，无溶血和凝集反应;对豚鼠主动全身过敏性试验与被动皮肤过敏试验均呈阴性。碳酸氢钠注射液对实验兔的股四头肌具有轻度刺激性在停药14天后也未恢复，但症状有减轻，同其上市药物对照的肌肉刺激性程度基本一致，临床使用途径为静脉注射，故碳酸氢钠注射液的临床前相关安全性评价符合要求，可供静脉注射使用，由于药物本身的特点，在临床上与许多药物存在配伍禁忌[9]，故临床上使用时需严格按说明使用。

参考文献：

[1]郑娟，雷晓鸣.小儿腹腔镜手术中应用碳酸氢钠纠正代谢性酸中毒时稀释液的选择[J].儿科药学杂志，2022，28（4）：48-50

[2] 国家食品药品监督管理局， 药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则.2014.5[S].

[3]马玉奎，高梅，贾庆文.冻干任用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）过敏性试验研究[J].视频与药品，2017，19（5）：310-313.

[4] 徐叔云，卞如濂，陈修.实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2002：237.

[5]赵三梅.碳酸氢钠对静脉刺激的预防， 中国误诊学杂志， 2005 ， 8（ 9 ） ： 1706

[6] 张娟，冷佳蔚，李水仙，等.舒洛地特注射液非临床安全性评价[J].中国药业，2021，30（6）：28-31.

[7]王 欣，周继春，景爱华，等.注射用间苯三酚的非临床安全性评价[J]. 河南科技大学学报（医学版），2017，35 （ 2 ）：100-103.

[8]冯燕.影响碳酸氢钠注射液质量的因素与控制措施[J].工业药学，2015，34（2）：119-124.

[9]莫锦，袁莉萍，蒋莉莉，等.碳酸氢钠注射液配伍禁忌文献分析[J].中国药业，2017，26（22）：77-79.

作者简介： 周艳艳（1984--），女，硕士，研究方向：药理毒理学

通讯作者：张俊明（1974.10—）、男、汉族，青海互助，副研究员，学士，研究主要方向为新药临床前药理毒理，