樊小容，张旭升，黄战军，谭小青，蔡博治

研究发现醛固酮不仅可促进心肌、血管及肾脏等多器官纤维化，还可促进体内炎症反应、氧化应激反应等，导致心血管重构[1-3]。参与心血管重构的机制十分复杂，从醛固酮生物学效应入手去探讨相关可能机制，对临床防治心血管重构具有重要的指导意义。研究证实麝香保心丸具有保护血管内皮、稳定逆转斑块以及抑制血管钙化的作用[4-5]，在临床上防治心血管疾病发生、发展发挥重要的作用；前期研究也证实麝香保心丸可通过抑制炎性因子单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达改善代谢综合征诱导的主动脉纤维化[6]，但能否改善醛固酮诱导的主动脉纤维化尚不清楚，本实验观察麝香保心丸对醛固酮诱导的主动脉纤维化的影响，并初步探讨可能的分子机制。

1 材料与方法

1.1 实验药品 醛固酮购自Sigma公司，MCP-1和白细胞介素-6(IL-6)试剂盒购自北京华英生物研究所；MCP-1和IL-6受体一抗购自北京博奥森，二抗购自北京中杉金桥。麝香保心丸购自上海和黄药业有限公司。其余为进口或国产分析纯试剂。

1.2 动物造模取材 8周龄雄性SD大鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。将SD大鼠随机分为正常组、醛固酮组和醛固酮+麝香保心丸组，每组8只。醛固酮组采用皮下注射醛固酮20 μg/d；醛固酮+麝香保心丸组在醛固酮组基础上每天予麝香保心丸(25 mg/kg)灌胃1次，常规饲养6周。麻醉后暴露心脏，取血，低温分离血清。摘取胸主动脉，石蜡包埋用于染色。

1.3 主动脉组织Masson染色 取大鼠胸主动脉组织石蜡切片，常规脱蜡至水，Masson复合染色液5 min，5%磷钨酸5～10 min，亮绿染色液5 min。

1.4 大鼠血清MCP-1和IL-6水平测定 取血清约200 μL，采用放射免疫法测定血清MCP-1和IL-6水平，具体步骤按试剂盒说明书操作。

1.5 免疫组织化学法检测主动脉组织MCP-1和IL-6受体的表达 取大鼠胸主动脉组织石蜡切片，常规脱蜡至水，滴加一抗孵育过夜，滴加二抗，二氨基联苯氨(DAB)显色，苏木素复染，中性树胶封片，具体步骤详见说明书。

2 结 果

2.1 3组大鼠主动脉组织胶原染色比较 醛固酮组与正常组相比，大鼠血管壁增厚，细胞间质可见大量胶原明显沉积，用麝香保心丸干预后，胶原沉积有所改善。详见图1。

图1 大鼠主动脉组织Masson染色(×40)(蓝色为胶原成分)

2.2 3组大鼠MCP-1和IL-6及其相应受体表达水平比较 醛固酮组血清炎性因子MCP-1和IL-6较正常组明显升高，主动脉组织炎性因子相应受体表达同步上调；经麝香保心丸干预后，炎性因子及其相应受体表达明显下调。详见表1、图2、图3。

表1 3组大鼠血清MCP-1、IL-6水平比较(±s) 单位：ng/L

图2 大鼠主动脉组织MCP-1受体免疫组化染色(×100)(棕黄色为阳性表达)

图3 大鼠主动脉组织IL-6受体免疫组化染色(×100)(棕黄色为阳性表达)

3 讨 论

研究证明，醛固酮增多是独立的心血管危险因素。醛固酮不仅可引起体内水钠潴留，血压升高，促进心血管组织、肾脏等多器官组织纤维化，并且醛固酮水平与炎性因子表达及动脉粥样硬化的程度密切相关，可能涉及的机制与激活核因子κB(NF-κB)活性及抑制尾加压素Ⅱ表达、细胞间黏附分子-1及结缔组织生长因子转录有关[7-9]。血管纤维化是血管重构的重要病理基础，主要表现为血管平滑肌细胞增殖、细胞间质胶原蛋白沉积等，导致血管壁增厚、僵硬。前期体内研究发现，外源性醛固酮可导致大鼠主动脉纤维化，同时炎性因子MCP-1和IL-6表达明显增加，提示醛固酮可促进血管纤维化，并且可以促进炎性因子表达[3]。也有研究观察到醛固酮增多可诱导心血管系统多种细胞增殖、炎性细胞浸润及炎性因子的表达增多，促进胶原蛋白的合成及分泌，主要涉及炎症反应、氧化应激等机制[10-11]。而炎症反应贯穿主动脉重构病理过程始终。临床研究观察到颈动脉粥样硬化程度与血清炎性因子如IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达呈正相关[12]，在动脉粥样硬化家兔模型中观察到血清IL-6等炎性因子表达明显升高，主动脉斑块自噬体形成减少，在ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠模型中亦发现炎性因子IL-6和MCP-1表达明显上调，以上研究均证实炎症反应与主动脉重构密切相关[13-14]。细胞增生、胶原蛋白合成分泌增多、炎性细胞浸润及炎性因子表达上调等是主动脉纤维化的重要因素，可见醛固酮与主动脉重构密切相关，如何抑制主动脉重构的进程是目前研究的重点。

麝香保心丸具有芳香温通、益气强心和改善循环功效，大量研究证实麝香保心丸具有调控炎症反应、保护血管内皮细胞、促进新生血管形成及稳定动脉粥样硬化斑块等作用[15-18]。进一步研究还证实麝香保心丸可抑制心血管纤维化，可能的分子机制与降低组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管紧张素Ⅱ的表达有关，与抑制TGF-β1/Smads信号转导通路的过度激活有关[19-20]。

本实验发现醛固酮可诱导大鼠主动脉组织胶原蛋白沉积，管壁增厚，提示主动脉纤维化，血清炎性因子MCP-1、IL-6水平和主动脉组织相应炎性因子受体表达明显上调，再次验证醛固酮具有促主动脉组织纤维化和促炎症反应等生物学效应。应用麝香保心丸干预后，主动脉纤维化程度改善，同时大鼠血清炎性因子及其受体的表达明显下调，证实麝香保心丸抗炎、抗纤维化效应明确，这将为主动脉纤维化的机制研究及防治提供了新的思路和作用靶点。