曾小艳，李永平，赵 钰，童 丽*

（1.青海大学 医学院，青海 西宁 810016；2.青海大学 医学院，青海省糖脂代谢疾病防控中医药重点实验室，青海 西宁 810099；3.青海省中医院 泌尿外科，青海 西宁 810099）

2 型糖尿病是一种内分泌代谢性疾病，主要特征是持续性高血糖，主要病因是胰岛素分泌减少或胰岛素抵抗所致[1]。糖尿病可引起多种并发症，如：血管损伤、神经异常等，严重影响患者的生活质量，预计到 2045 年我国糖尿病患者将增至1.2 亿人[2]。2 型糖尿病的发病与体内氧化应激密切相关，且常伴有体内糖脂代谢异常[3]。

覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子Rubus chingiiHu 的干燥成熟果实，药用价值极高，具有补肾固精的功效。覆盆子含有丰富的活性成分，原花青素是覆盆子中重要的活性成分之一[4-5]。现代药理学研究发现覆盆子具有调节血糖、血脂、减轻氧化应激损伤、抗衰老等作用[6]。目前，覆盆子原花青素的降糖作用机制还未有报道，本实验提取了覆盆子原花青素，建立了2 型糖尿病大鼠模型，观察覆盆子原花青素对2 型糖尿病大鼠的糖脂代谢及抗氧化影响，为覆盆子原花青素治疗糖尿病提供更多科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 选用100 只雄性SD 大鼠，6 周龄，体质量为（200 ± 20） g。购自西安交通大学实验动物部［动物许可证号：SCXK （陕） 2008-001］。

1.1.2 覆盆子原花青素的提取 覆盆子购自青

海省中医院，经青海大学中藏药研究所童丽教授鉴定为正品。将覆盆子粉碎后用丙酮水浸泡，反复提取3 次，过滤，合并滤液，旋转蒸发干，用D101 大孔树脂柱纯化，得到原花青素（含量＞95%），4 ℃保存备用。

1.1.3 主要试剂与仪器 链脲佐菌素（STZ）（批号：S8050）购自北京索莱宝科技有限公司；盐酸二甲双胍片（批号：H20031104）购自正大天晴药业集团；甘油三酯（TG） 、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） 、超氧化物歧化酶（SOD） 活性、丙二醛（MDA） 测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；胰岛素（INS）试剂盒及肝糖原试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。Touch one 型血糖仪及试纸（上海强生医疗器械有限公司）；T-6500 型酶标仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司）；TU-1810 型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2 方法

1.2.1 糖尿病大鼠模型的建立及给药方法 实验前大鼠适应性饲养一周。一周后，抽取大鼠称重、尾尖采血测血糖，随机抽取10 只作为正常组，余下大鼠禁食24 h。按60 mg/kg 给大鼠腹腔内注射STZ。72 h 后尾尖取血测血糖，以血糖值> 16.7 mmol/L 为2 型糖尿病造模成功标准[7]。将造模成功的大鼠随机分为模型组、二甲双胍组（150 mg/kg）、覆盆子原花青素高、中、低剂量组（150 mg/kg、100 mg/kg、50 mg/kg），每组10 只大鼠。正常组、模型组用等体积的生理盐水灌胃。各用药组按相应剂量灌胃，各用药组灌胃体积为10 mg/kg。每天灌服1次, 连续灌胃8周。

1.2.2 指标测定 分别于给药前，给药后4 周、8 周测定空腹血糖（FPG）。测定前24 h 停止给药，用10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血，离心,取上清液，严格按照试剂盒说明测定TC、TG、HDL-C、LDL-C、INS 及肝糖原。

取大鼠的肝脏组织，按1 ∶9 重量体积于冰浴中捣碎，匀浆，匀浆液离心 （3 000 r/min） 15 min, 取上清液，按照试剂盒说明测定GSH-Px 、SOD、MDA。

1.2.3 统计学方法 用SPSS 23.0 软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 覆盆子原花青素对糖尿病大鼠体质量的影响

造模前各组大鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）。造模后，模型组、二甲双胍组及原花青素各治疗组体质量较正常组明显下降（P＜0.001）；原花青素治疗后，各剂量组体质量较模型组升高 （P＜0.001），见表1。

表1 覆盆子原花青素对各组大鼠体质量的影响（±s，n =10，g）Tab.1 The effect of raspberry proanthocyanidins on the body weight of rats in each group（±s，n =10，g）

表1 覆盆子原花青素对各组大鼠体质量的影响（±s，n =10，g）Tab.1 The effect of raspberry proanthocyanidins on the body weight of rats in each group（±s，n =10，g）

注：与正常组比较，***P ＜0.001；给药组与模型组比较，###P ＜0.001。

组别 造模前 造模后 给药第4 周 给药第8 周正常组 233.50 ± 12.18 260.50 ± 6.49 303.77 ± 11.38 335.14 ± 19.11模型组 233.30 ± 22.12 213.85 ± 12.06*** 198.85 ± 7.25*** 180.62 ± 5.09***二甲双胍组 235.50 ± 18.11 213.93 ± 10.16*** 229.35 ± 10.32### 251.70 ± 13.50###原花青素高剂量组 236.80 ± 20.47 212.51 ± 8.69*** 226.50 ± 8.62### 263.33 ± 9.89###原花青素中剂量组 232.70 ± 8.01 213.07 ± 9.16*** 227.56 ± 10.45### 252.70 ± 7.56###原花青素低剂量组 233.30 ± 7.29 212.66 ± 9.55*** 224.75 ± 5.78### 227.68 ± 6.79###F 0.107 39.019 149.541 197.188 P 0.990 0.000 0.000 0.000

2.2 覆盆子原花青素对糖尿病大鼠FPG 的影响

治疗前模型组和各用药组大鼠的FPG 比正常组明显升高（P＜0.001）；原花青素治疗后4 周和8 周后，二甲双胍组和原花青素各剂量组FPG 较模型组下降（P＜0.01），见表2。

表2 覆盆子原花青素对各组大鼠FPG 的影响（±s，n =10，mmol/L）Tab.2 The effect of raspberry proanthocyanidins on FPG of rats in each group （±s，n =10，mmol/L）

表2 覆盆子原花青素对各组大鼠FPG 的影响（±s，n =10，mmol/L）Tab.2 The effect of raspberry proanthocyanidins on FPG of rats in each group （±s，n =10，mmol/L）

注：与正常组比较，***P ＜0.001；给药组与模型组比较，##P ＜0.01，###P ＜0.001。

组别 给药前 给药第4 周 给药第8 周正常组 4.54 ± 1.08 4.74 ± 0.89 5.01 ± 0.95模型组 26.93 ± 1.47*** 26.03 ± 0.99*** 25.93 ± 0.82***二甲双胍组 26.63 ± 1.66*** 20.77 ± 0.99## 16.25 ± 0.97###原花青素高剂量组 25.97 ± 1.49*** 20.32 ± 1.05## 15.45 ± 0.74###原花青素中剂量组 25.93 ± 1.31*** 22.85 ± 0.97## 17.19 ± 0.96###原花青素低剂量组 26.13 ± 1.72*** 23.77 ± 1.52## 21.05 ± 1.24###F 365.773 492.191 528.097 P 0.000 0.000 0.000

2.3 覆盆子原花青素对糖尿病大鼠INS 和肝糖原的影响

与正常组比较，模型组的INS 和肝糖原水平明显下降（P＜0.001）。经原花青素治疗后，各剂量组INS和肝糖原水平均较模型组升高（P＜0.01），见表3。

表3 覆盆子原花青素对各组大鼠INS 和肝糖原的影响（±s，n = 10）Tab.3 Effects of raspberry proanthocyanidins on INS and liver glycogen of rats in each group（±s，n = 10）

表3 覆盆子原花青素对各组大鼠INS 和肝糖原的影响（±s，n = 10）Tab.3 Effects of raspberry proanthocyanidins on INS and liver glycogen of rats in each group（±s，n = 10）

注：模型组与正常组比较，***P＜0.001；给药组与模型组比较，##P＜0.01。

组别 INS /（mIU/L） 肝糖原 /（ng/L）正常组 27.68 ± 1.03 11.93 ± 0.32模型组 16.56 ± 0.53*** 6.85 ± 0.11***二甲双胍组 24.41 ± 0.94## 11.76 ± 0.08##原花青素高剂量组 24.80 ± 0.83## 11.58 ± 0.06##原花青素中剂量组 20.08 ± 0.71## 11.13 ± 0.09##原花青素低剂量组 17.59 ± 0.97## 7.71 ± 0.22##F 271.242 1 685.418 P 0.000 0.000

2.4 覆盆子原花青素对糖尿病大鼠血脂的影响

模型组大鼠的TC、TG、LDL-C 水平较正常组大鼠明显升高（P＜0.001），HDL-C 水平下降（P＜0.001）。经治疗8 周后，与模型组比较，原花青素各剂量组TC、TG、LDL-C 明显下降 （P＜0.05），HDL-C 水平升高（P＜0.05），见表4。

表4 覆盆子原花青素对各组大鼠血脂的影响（±s，n = 10，mmol/L）Tab.4 Effects of raspberry proanthocyanidins on blood lipids of rats in each group（±s，n = 10，mmol/L）

表4 覆盆子原花青素对各组大鼠血脂的影响（±s，n = 10，mmol/L）Tab.4 Effects of raspberry proanthocyanidins on blood lipids of rats in each group（±s，n = 10，mmol/L）

注：模型组与正常组比较，***P ＜0.001；给药组与模型组比较，#P ＜0.05，##P ＜0.01， ###P ＜0.001。

组别 TC TG HDL-C LDL-C正常组 2.32 ± 0.07 0.99 ± 0.96 2.46 ± 0.08 0.56 ± 0.08模型组 4.52 ± 0.42*** 2.31 ± 0.21*** 1.29 ± 0.06*** 1.90 ± 0.10***二甲双胍组 2.63 ± 0.15### 1.89 ± 0.09### 1.46 ± 0.07## 1.23 ± 0.09###原花青素高剂量组 2.93 ± 0.11### 1.75 ± 0.10### 1.62 ± 0.09## 0.95 ± 0.07###原花青素中剂量组 3.27 ± 0.12### 1.93 ± 0.09### 1.45 ± 0.08## 1.31 ± 0.09###原花青素低剂量组 4.02 ± 0.22# 2.06 ± 0.07# 1.32 ± 0.06# 1.48 ± 0.06#F 154.881 136.921 336.245 299.707 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.5 覆盆子原花青素对糖尿病大鼠肝脏中GSHPx、SOD、MDA 水平的影响

模型组大鼠的GSH-Px 、SOD 水平较正常组明显下降（P＜0.001），MDA 水平较正常组明显升高（P＜0.01）。治疗后，原花青素各剂量组的GSHPx 、SOD 水平较模型组升高（P＜0.01），而MDA水平明显下降（P＜0.001），见表5。

表5 覆盆子原花青素对各组大鼠氧化指标的影响（±s，n = 10）Tab.5 Effects of raspberry proanthocyanidins on oxidation indexes of rats in each group（±s，n = 10）

表5 覆盆子原花青素对各组大鼠氧化指标的影响（±s，n = 10）Tab.5 Effects of raspberry proanthocyanidins on oxidation indexes of rats in each group（±s，n = 10）

注：模型组与正常组比较，**P ＜0.01，***P ＜0.001；给药组与模型组比较，##P ＜0.01，###P ＜0.001。

组别 GSH-Px /（U/mg） SOD /（U/mg） MDA /（mmol/mg）正常组 351.06 ± 5.74 81.35 ± 3.25 3.24 ± 0.13模型组 198.12 ± 4.17*** 63.26 ± 6.58*** 4.82 ± 0.14**二甲双胍组 300.63 ± 5.37### 74.80 ± 3.26## 3.51 ± 0.07###原花青素高剂量组 315.52 ± 5.63### 74.09 ± 4.41## 3.53 ± 0.14###原花青素中剂量组 268.96 ± 6.32### 70.21 ± 1.90## 3.64 ± 0.10###原花青素低剂量组 222.92 ± 4.65### 68.93 ± 1.66## 4.02 ± 0.21###F 1 164.653 25.069 116.513 P 0.000 0.000 0.000

3 讨论

糖尿病可引起多种并发症，且发病率逐年升高，是人类健康的重要威胁之一，有研究发现大约三分之一的糖尿病患者使用天然药物来控制血糖[8]。

胰岛素分泌不足是2型糖尿病重要的发病原因[9]。肝脏是糖脂代谢的中心，肝糖原是血糖的直接来源，肝糖原合成与分解的平衡是维持血糖正常的重要因素[10-11]。持续性高血糖会引起肝脏功能损害，导致代谢紊乱，使肝糖原减少，从而使血糖升高[12]。同时，肝糖原含量也可反应胰岛素含量的高低[13]。

2 型糖尿病常伴有血脂异常，当血糖代谢异常时，会导致胰岛素利用率下降，进而导致脂溶性激素活性升高，造成血脂升高；血脂代谢异常时，会导致脂肪组织分泌因子的功能下降，损伤胰岛细胞，使胰岛素分泌减少和胰岛素抵抗加重，从而导致血糖升高[14]。长期的高血糖、高血脂状态，会抑制抗氧化酶的活性，诱导氧化应激反应，从而损害细胞、组织的功能，导致糖代谢异常，促进糖尿病的发生[15]。GSH-Px 可分解有害的过氧化物保护细胞、组织；SOD 可通过清除体内的超氧阴离子起到抗氧化作用；MDA 是氧化应激的产物，可反应氧化对细胞损害的程度[16]。因此对于2 型糖尿病的治疗，探索具有调节糖脂代谢作用，升高胰岛素和肝糖原水平，同时可改善体内的氧化应激状态作用的药物具有重要的意义。覆盆子中含有丰富的原花青素，有研究显示，原花青素具有明显的降血糖作用[17]，但覆盆子原花青素对2 型糖尿病的糖脂代谢及抗氧化作用有无调节作用，目前尚没有研究。本实验研究结果显示，经覆盆子原花青素治疗后，糖尿病大鼠的INS 水平和肝糖原水平明显上升，空腹血糖明显下降，TG、TC 和LDL-C 明显下降，HDL-C 升高，糖尿病大鼠SOD、GSH-Px 的活性增加，MDA 的生成量明显减少，表明覆盆子原花青素对2 型糖尿病糖脂代谢及抗氧化作用具有明显改善作用，是值得深入开发的治疗糖尿病的药物。

4 结论

本研究通过观察覆盆子原花青素对2 型糖尿病大鼠模型的作用，比较了各组大鼠的体质量、FPG、INS、肝糖原、TC、TG、LDL-C、HDL-C 和GSHPx 、SOD、MDA 等指标，表明覆盆子原花青素对2型糖尿病大鼠具有较好地降糖作用，其作用机制可能与抗氧化、改善糖脂代谢、升高INS 和肝糖原含量相关。为该药治疗糖尿病的进一步开发提供了理论依据。但糖尿病的发病机制复杂、并发症多，对覆盆子原花青素治疗2 型糖尿病的机制需做更深入的研究。