吴华伟，刘 丹，陈晓春，高金源，邓 永，秦义娴，苏 佳，黄小洁，薛青红，陈延飞

(中国兽医药品监察所，北京 100081)

副流感病毒5型(Parainfluenza virus 5, PIV5)属于副黏病毒科腮腺炎病毒属，基因组为不分节段的单股负链RNA，全长15246 bp，由3’前导序列、5’尾随序列和7个非重叠基因组成：3’-N-P/V-M-F-SH-HN-L-5’，依次编码核衣壳蛋白(NP)、磷酸化蛋白(P)、V蛋白、膜基质蛋白(M)、小疏水性蛋白(SH)、血凝素-神经氨酸酶(HN)、聚合酶蛋白(L)[1]。SH蛋白作为病毒的主要包膜糖蛋白，能够抑制TNF-α介导的细胞凋亡[2-4]。2018年，中监所采用RT-PCR方法首次从某企业的猪伪狂犬病活疫苗中检测到PIV5污染[5]，随后在PIV5污染来源筛查中发现细胞和牛血清为主要的污染来源。对于兽用生物制品以及动物源性原辅材料中是否污染PIV5外源病毒的检测而言，RT-PCR方法仅可以作为初筛方法或企业内控方法，荧光抗体检查法是现行《中国兽药典》检测特定外源病毒的推荐方法。国外已有个别PIV5蛋白的单克隆抗体(如F蛋白)供应，但国内除PIV5 RT-PCR检测试剂盒外，尚无PIV5单克隆抗体或荧光抗体检测试剂供应，亟需开展PIV5 单克隆抗体研究。研究采用原核表达的PIV5 SH蛋白按常规方法免疫小鼠后，共筛选到3株杂交瘤细胞，均可识别PIV5毒株，为外源性PIV5污染检测用免疫荧光试剂奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 细胞、毒株、重组质粒、实验动物 Vero细胞、PIV5/01株，均由中国兽医药品监察所保存；pET43a-SH重组质粒，由中国兽医药品监察所构建及鉴定；8周龄Balb/c雌性小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2 主要试剂 表达菌株BL21(DE3)plys购自北京全式金公司；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；……