徐焰平 王翠玲＊

（泉州医学高等专科学校检验预防学院，福建 泉州 362010）

铁皮石斛是一种药用植物，化学成分经药理学研究具有提高免疫功能、抗肿瘤等作用[1]。内生真菌生物类群丰富，经研究发现于各种植物体内普遍存在，药用植物内生真菌能产生与宿主相同或类似药用活性成分[2]。前期有多个研究者从药用植物铁皮石斛中分离内生真菌，从中筛选出能够产生抗菌、提高机体免疫力或抗肿瘤成分的内生真菌[3]。从中寻找新活性先导化合物，拓宽和丰富新药源发现的渠道，可通过规模化的发酵获取较多量的产物，用于新药研发[4]。本项目从泉州仿生栽培的铁皮石斛中分离出内生真菌，进行抑菌活性研究，并对具有抑菌活性的内生真菌进行鉴定。

一、材料与仪器

1.材料

龙眼树上仿生态栽培的铁皮石斛来自泉美生物科技有限公司，标准菌株金色葡萄球菌ATCC 25923、大肠杆菌ATCC 25922和蜡样芽孢杆菌ATCC 14579由本实验室提供。

2.药品和试剂

马铃薯葡萄糖琼脂、LB培养基购自广东环凯生物科技有限公司、PBS缓冲液（pH值7.4）在本实验室配置。ITS4 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’和ITS5 5'-GGAAGTAAAA GTCGTAACAAGG-3’由大连Takara公司合成。

3.仪器设备

生物安全柜、显微镜、培养箱、analytikjena EasyCycler PCR仪、analytikjena UVsolo toutch等。

二、实验方法

1.内生真菌的分离

铁皮石斛样本采集到实验室后应该于24h内进行内生真菌的分离。从采集的样品中选取新鲜健康的铁皮石斛，先用自来水冲洗干净，去除表面杂土颗粒后自然晾干备用。根部和茎部剪成1cm左右的小段，叶片剪成0.5×0.5cm大小置于小烧杯中。在生物安全柜中，用75%酒精浸泡60s，接着用无菌水浸洗3次，再用3%次氯酸钠（有效氯）溶液浸泡4min，最后再用无菌水浸洗3次。……