李迪诺，李谌

(1.锦州医科大学附属第一医院胃外科；2.锦州医科大学附属第一医院分子检测中心，辽宁 锦州 121000)

胃癌是全球第二大常见的恶性肿瘤[1]。原癌基因的激活、抑癌基因的缺失等在胃癌的发生发展中扮演重要角色[2]。

CHD1L(chromodomain helicase/adenosine triphosphatase DNA binding protein 1-Like，CHD1L)位于人类1号染色体的长臂的1q21区，由53152个碱基对组成，包含23个外显子、一个编码长度为897个氨基酸的蛋白质开放阅读结构和一个保守区域[3-4]。

CHD1L过表达会导致染色质过度松弛，使DNA碱基发生错配现象，导致癌症的演变[5-6]，过度表达CHD1L显著促进结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移，沉默CHD1L基因可降低前列腺癌细胞的侵袭迁移能力[7]，下调CHD1L mRNA表达水平肝癌细胞增殖能力、迁移和侵袭能力明显下降[8]；靶向CHD1L通过PI3K/Akt/MMP信号通路可以抑制乳腺癌细胞的侵袭[9]；但能否促进胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭转移未有相关研究，本文通过研究胃癌生物学行为过程中CHD1L信号通路调控机制，探究其潜在价值。

1 材料与方法

1.1 实验材料

人胃粘膜上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、MGC-823、MGC-803来源于国家中心细胞库，胃癌MGC-823细胞株中的CHD1L表达含量较高，可以用于后续试验。

慢病毒pLVshRNA-Puro构建由美国Clon-tech公司完成、Western Blot测定相关试剂与耗材、细胞增殖活性、凋亡检测相关试剂与耗材购自美国Invitrogen公司、细胞侵袭试验所需试剂与耗材由Millipore公司提供。

1.2 实验方法

1.2.1 慢病毒shRNA序列构建

GENEBANK数据库对CHD1L mRNA全序列进行搜索，利用在线设计软件(http：//www.exiqon.com/)，设计特异性shRNA序列(CHD1L-shRNA-1、CHD1L-shRNA-2、CHD1L-shRNA-3)。将pLVshRNA-Puro片段(NotⅠ和EcoRⅠ双酶切处理)与5’端磷酸化，互补片段退火处理后的合成片段连接，命名为pLVshRNA-Puro-CHD1L，阴性对照组命名为pLVshRNA-Puro-NC，利用大肠杆菌K-12的衍生菌DH5α制备阳性克隆质粒，经测序鉴定后将阴性对照质粒和干扰质粒进行包装后保存于-80 ℃冰箱内。……