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检测猪圆环病毒4型实时荧光PCR方法的建立及应用

2021-12-23王金凤刘立兵袁万哲马宏伟马增军王建昌韩庆安

中国兽医学报 2021年11期
关键词:检测方法

张 倩,王金凤,刘立兵,付 琦,袁万哲,赵 款,马宏伟,马增军,王建昌*,韩庆安*

(1.河北省动物疫病预防控制中心,河北 石家庄 050035;2.河北科技师范学院 动物科技学院,河北 秦皇岛 066004;3.石家庄海关技术中心,河北 石家庄 050051;4.河北农业大学 动物医学学院,河北 保定 071001)

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)为无囊膜单股负链环状 DNA 病毒,属于圆环病毒科(circoviridae)、圆环病毒属(circovirus),是目前发现最小的在哺乳动物体内复制的DNA病毒之一[1-2]。目前已报道的猪圆环病毒有4种:猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)于1974年被首次发现并被证实对猪无致病性[3-4];猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)于1998年首次报道,目前已成为与多种猪临床疫病综合征相关的最重要病原之一[5-6];猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)是2016年从美国患病猪中首次鉴定出的一种新型猪圆环病毒[7-8],目前已通过细胞培养成功分离[9],但致病性还有待进一步研究[10-11];猪圆环病毒4型(porcine circovirus 4,PCV4)是2019年在我国湖南省患有严重临床疾病(包括呼吸道疾病、腹泻和猪皮炎与肾病综合征)的猪群中首次发现的一种新型PCV,与PCV1~3型具有显著的遗传差异[12]。猪圆环病毒4型(PCV4)的基因组大小约为 1 770 nt,包含12个开放阅读框(open reading frame,ORF),其中ORF1和ORF2是两个主要的开放阅读框。ORF1大小为 891 nt,编码296个氨基酸的复制酶蛋白(replicase protein,Rep);ORF2大小为687 nt,编码228个氨基酸的衣壳蛋白(capsid protein,Cap)[12]。

目前研究表明,PCV4在我国湖南、河南、山西、江苏和广西等地猪场中均存在不同程度的流行[12-16]。周继勇等[12]对湖南省187份样品的检测结果显示,PCV4阳性率高达12.8%,且在鼻拭子和血清样品中阳性率最高。TIAN等[13]对河南省和山西省63份样品的PCV4检测阳性率为25.40%,在淋巴结、肺脏和肾脏中阳性检出率较高,依次为66.67%,17.14%,15.38%。……

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