卢泽原，睢大筼，于晓风，付雯雯，徐华丽*

（吉林大学药学院·吉林长春·130021）

结肠癌（Colon cancer,CRC）是最常见的恶性消化道肿瘤之一,也是全球第三大癌症[1-2]。根据世界卫生组织统计,结肠癌是癌症相关死亡的第二大原因[3]。全球每年报告有120万新增病例和60万死亡病例[4]。其恶性程度高,发病率逐年加快,转移性强,治愈率较低且预后极差,死亡率高,并且呈现出越来越年轻化的趋势[5]。20(S)-原人参二醇（20(S)-PPD）是从人参（西洋参）的根、茎、叶中提取得到的20(S)-原人参二醇型皂苷（如Rb1、Rb3、Rg3、Rh2）的苷元,本课题组经多年研究证实其具有良好的抗肿瘤作用[6-10]。本课题组前期研究发现,20(S)-PPD的抗肿瘤作用与其抑制PI3K/Akt通路的激活、诱导肿瘤细胞凋亡有关,但PPD对肿瘤的侵袭转移作用尚不明确[7]。20(S)-PPD是否可抑制结直肠SW620细胞迁移、转移,有待进一步研究。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

20(S)-PPD由吉林大学化学学院天然药物化学研究室金永日教授提供；SW620细胞购自上海美轩生物科技有限公司；Matrigel购自BD；E-cadherin,Vimentin抗体购自Cell Signaling Technology；高糖DMEM培养液购自Invitrogen；其他试剂由长春鼎国昌盛生物技术有限公司提供。

1.2 实验仪器

酶标仪（Molecular Devices,USA）；荧光倒置显微镜TE2000-M（Nikon）；Mini-Protean垂直电泳系统（Bio-Rad）。

2 实验方法

2.1 MTT实验

选取对数生长期细胞,0.25%胰蛋白酶消化细胞,用培养液稀释,接种于96孔板,每孔200μl。贴壁24 h后加入不同浓度20(S)-PPD作用20 h,每孔加入MTT 20μl,继续孵育4 h,570 nm测OD值,计算细胞生存率。

2.2 细胞迁移实验

选取对数生长期细胞,0.25%胰蛋白酶消化细胞,用无血清培养液稀释细胞,接种于Transwell小室。加入20(S)-PPD（10、20、30μM）作用24 h,加入1%结晶紫,染色,荧光倒置显微镜下拍照,ImageJ软件计算图片中染色细胞数量。……