刘 哲,王 旖,温玉婷,袁 慧,朱夏茹,杜军辉,*

(1西安市第九医院交叉医学研究室,西安 710054;2西安市第九医院转化医学中心;3西安市第九医院眼视光中心;*通讯作者,E-mail:djh79918@163.com)

趋化素(chemerin)是一种脂肪细胞因子,在许多疾病中发挥重要生理病理学作用。研究发现,多囊卵巢综合征患者外周血chemerin水平明显升高[1],在多种与糖尿病相关的疾病中表达水平异常,如妊娠期糖尿病、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)等[2-5]。趋化因子样受体1(chemokine-like receptor 1,CMKLR1)是chemerin的受体,两者结合可以产生一系列生物学效应。我们前期研究发现,DR患者血清chemerin表达水平升高[5],提示chemerin可能参与了DR的进展。视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells, RPE)在许多眼底疾病中发挥重要作用,其病理改变参与眼底病变的发生及发展。近年来,研究表明,自噬与炎症在DR进展中发挥重要作用[6-10]。在以往研究中发现白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与DR密切相关,参与病变的进展[11-13]。在动物模型中发现IL-1β在糖尿病大鼠血清和视网膜中表达升高[11,12],TNF-α在DR患者血清中表达水平升高,是DR发生发展的独立危险因素[13],与DR病情严重程度有关[14]。关于Chemerin/CMKLR1对RPE细胞IL-1β、TNF-α表达及自噬的影响尚不清楚。因此,本研究旨在探讨Chemerin/CMKLR1对RPE表达细胞炎症因子IL-1β、TNF-α及自噬的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人视网膜色素上皮细胞系(ARPE-19细胞)购自中国科学院上海细胞生物研究所,重组人脂肪因子chemerin购于美国PeproTech公司,LC3、Beclin-1购于美国CST公司,IL-1β、TNF-α购于美国CST公司,α-NETA购于美国MCE公司,其他细胞培养耗材、试剂购自碧云天生物技术公司。

1.2 细胞培养与分组

按细胞培养说明书培养ARPE-19细胞株,ARPE-19细胞采用RPMI-1640培养液,其中添加10%胎牛血清、100 U/ml青霉素及100 μg/ml链霉素,于37 ℃、5% CO2加湿培养箱中培养。……