胡 杨,张 宇,吕俊杰,薛 欢,高媛媛

(1山西医科大学药理学教研室,太原 030001;2细胞生理学教育部重点实验室,山西医科大学生理学系;3山西医科大学化学教研室;4山西医科大学微生物与免疫学教研室;*通讯作者,E-mail:891583967@qq.com)

脑衰反应调节蛋白2(collapsin response mediator protein 2,CRMP2)是一种具有多种神经功能的磷蛋白,在海马区和脑皮质表达丰富,调节微管功能并参与细胞骨架的形成,调节神经元极性及迁移,参与突出链接及轴突运输,参与多种电压和配体门控离子通道调控[1,2]。大量研究发现,CRMP2蛋白表达及修饰异常与多种疾病的发生发展密切相关,包括阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、慢性疼痛、双相情感障碍、缺血缺氧性脑病和癌症等[3]。研究表明,CRMP2与AD起病早期的Tau蛋白异常及神经纤维缠结密切相关[4]。主流的β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)级联理论认为,Aβ在脑内过度沉积并诱导级联反应进而引起神经细胞凋亡,对AD的发生发展具有重要作用[5]。Aβ在AD中主要以Aβ1-42和Aβ1-40两种结构存在,其中Aβ1-42的神经毒性较强,人工合成的Aβ25-35与Aβ1-42具有接近的神经毒性[6]。目前,CRMP2蛋白表达及修饰异常对各种因素诱导细胞损伤的影响研究较少。本研究旨在通过慢病毒感染使CRMP2在SH-SY5Y细胞中过表达及沉默,探究CRMP2对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响,进一步揭示CRMP2在AD病理机制中的作用,为AD的治疗提供新的靶点及理论基础。

1 材料与方法

1.1 细胞系及主要试剂

SH-SY5Y细胞系购自江苏凯基生物技术股份有限公司。培养基成分:RPMI-1640、10%小牛血清;培养环境:5% CO2、37 ℃恒温孵育箱。RPMI-1640培养液购自美国Gibco公司;小牛血清购自以色列……