李 帅,董 震,陈 军,张 伟*

(1青岛大学附属青岛妇女儿童医院骨科,青岛 266000;2新沂市人民医院骨科;*通讯作者,E-mail:gukeyisheng666@126.com)

骨肉瘤源于成骨细胞,是一种主要发生于青少年时期的恶性骨肿瘤,严重危害未成年人生命健康[1]。手术、化疗和靶向治疗是骨肉瘤的主要治疗手段[2]。骨肉瘤的致死率非常高,5年生存率非常低,骨肉瘤的侵袭性和快速增殖是不良预后的重要因素[3]。探究骨肉瘤细胞侵袭和增殖的机制是骨肉瘤研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)广泛参与基因的复制、转录、翻译过程,在细胞内负责调节各种生物学功能[4]。人类肿瘤中通常存在lncRNA表达异常,其参与癌症的转移、耐药、生长等过程[5]。DLGAP1-AS1是一种新近发现的lncRNA,定位于染色体18p11.31,其在结直肠癌、胶质瘤、肝癌等组织中表达失调,与上充、关[6]。DLGAP1-AS1在骨肉瘤细胞中的表达和功能尚不明确。本研究通过生物信息学技术预测发现miR-744-3p可能是DLGAP1-AS1的靶点。miR-744-3p在喉鳞状细胞癌中高表达,与喉鳞状细胞癌的恶性进展密切有关[7]。DLGAP1-AS1和miR-744-3p在骨肉瘤中的靶向关系并不清楚。本研究检测DLGAP1-AS1在骨肉瘤细胞系中的表达,验证DLGAP1-AS1通过吸附miR-744-3p调节骨肉瘤细胞的侵袭和细胞周期。

1 材料和方法

1.1 细胞与主要试剂

人正常成骨细胞hFOB1.19和人骨肉瘤细胞Saos2、HOS、U-2OS、MG-63、143B购自美国标准培养物保藏中心。胎牛血清和培养基购自美国Gibco公司。DLGAP1-AS1野生型(DLGAP1-AS1-WT)和突变型(DLGAP1-AS1-MUT)报告载体、DLGAP1-AS1过表达载体(pcDNA-DLGAP1-AS1)、对照空载体(pcDNA)、miR-744-3p模拟物、阴性对照序列(miR-NC)购自上海吉玛制药有限公司。qRT-PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司。细胞周期试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司。……