向 楠,陈 涛,肖 丽,王 毓*,李 静

(1山东大学附属山东省立第三医院妇产科,济南 250031;2山东第一医科大学附属济南妇幼保健院妇产科;*通讯作者,E-mail:wysdslyy11@126.com)

卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,也是女性肿瘤相关死亡的重要原因[1]。卵巢癌的发病率逐年上升,然而其具体发病机制并不明确[2]。探究参与调控卵巢癌发生和发展的关键基因,对卵巢癌的防治可能具有重要意义。微小RNA(miRNA)通过靶向作用于下游基因,影响细胞多种生物学功能如分化、转移、增殖等,可能成为人类疾病诊断的生物标志物[3]。越来越多的证据表明,miRNA的异常表达在卵巢癌的发生和发展过程起到关键作用[4,5]。miR-3911由22个核苷酸构成,仅有研究报道miR-3911在常染色体显性遗传多囊肾病患者血清中的表达明显下降[6]。目前miR-3911对卵巢癌细胞增殖和迁移能力影响的研究未见报道。本研究通过检测卵巢癌细胞株中miR-3911的表达,建立miR-3911过表达细胞系,探讨miR-3911对卵巢癌细胞生物学性状的影响及相关机制,为卵巢癌的防治提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞株与主要试剂

正常卵巢上皮细胞(IOSE80)和卵巢癌细胞株(A2780、OC3、HO-8910、SKOV-3)购于美国ATCC公司;无意义序列(NC)mimic、miR-3911 mimic、NF-κB激活蛋白(NF-κB activating protein,NKAP)mRNA的3′-UTR荧光素酶重组质粒(NKAP-WT和NKAP-MUT)购于广州锐博生物科技有限公司;Lipofectamine 3000转染试剂盒购于美国Invitrogen公司;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)试剂盒、CCK-8试剂盒和结晶紫溶液购于上海碧云天生物技术有限公司;双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于美国Promega公司;RPMI-1640培养基、DMEM培养基购于美国Gibco公司;Transwell小室购自美国康宁公司;一抗NF-κB、p-IκBα、p-p65、GAPDH、NKAP和辣根过氧化物酶标记的二抗购于美国CST公司。……