马文贤，黄琼，董振耀

微小RNA（miRNA）为长度在19～23个核苷酸之间的短链非编码微小RNA，其在多种疾病中均具有调控功能，其中包括牙周炎。微小RNA-218-5p（miR-218-5p）在牙周炎中的作用虽然已得到部分学者的肯定，但其调控机制与Notch 信号通路的关系尚未清楚。Notch 信号通路在维持细胞生长、分化方面具有关键作用，其在疾病的进程中具有重要作用。Notch 信号通路通过Notch 蛋白与相邻细胞上的配体Jagged 1（JAG1）蛋白结合而被激活，Notch蛋白的裂解在细胞内发生，导致Notch 细胞内结构域易位到细胞核中并进一步调节Notch 靶基因表达。Notch 信号通路参与成骨分化过程和破骨细胞生成的诱导过程。但是miR-218-5p 与JAG1 在人牙周膜干细胞（hPDLSCs）中的作用关系尚不清楚。2018年12月至2019年9月，本研究拟以人牙周膜干细胞hPDLSCs 为研究对象，观察抑制miR-218-5p、过表达JAG1 对hPDLSCs 细胞活性、分化的影响，揭示其机制，为牙周膜干细胞治疗牙周炎，促进牙周骨组织再生提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

hPDLSCs 购自ATCC；兔抗人JAG1、Ⅰ型胶原蛋白（Col-1）、骨钙素、Runt 相关转录因子2（Runx2）多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）抗体均购自Santa Cruz；pcDNA 3.1 载体购自康为世纪；α-MEM 培养基购自Hyclone 公司；胎牛血清均购自Gibco 公司；噻唑蓝（MTT）试剂盒购自美国GIBCO 公司；转染试剂Lipofectamine2000 购自北京索莱宝科技有限公司；BCA 蛋白定量试剂盒购自上海源叶生物公司；逆转录试剂盒购自大连Takara 公司；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜购自德国罗氏诊断有限公司；ECL发光液购自北京普利莱基因技术有限公司；RIPA裂解液购自碧云天生物技术公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega 公司。……