于云祥，龚泰芳，刘小涛，柯文，李彬彬

骨髓瘤是一种骨髓内单克隆浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，其发病率呈增长趋势，极大威胁人类生命健康。骨髓瘤的治疗主要以药物治疗、造血干细胞移植术为主。目前，骨髓瘤的发病机制尚未明确，临床治疗疗效不佳。探讨骨髓瘤发生和发展的分子机制并寻找该疾病的治疗靶点具有重要意义。微小RNA（miRNA）是一类非编码RNA，参与调控细胞增殖、分化和凋亡等生命过程，在肿瘤的发生发展中起重要作用。有报道称，miR-335-3p在多发性骨髓瘤病人外周血中表达下调，外周血miR-335-3p 水平变化对骨髓瘤诊断具有重要意义。但是，miR-335-3p 对骨髓瘤发生发展的影响及其作用机制还未知。本研究于2018年5月至2019年1月主要探讨了miR-335-3p 对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其可能的调控机制，以期为骨髓瘤的治疗提供新靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞和实验试剂

骨髓瘤细胞KM3和U266细胞系购自中科院上海细胞库；胎牛血清和RPMI 1640培养基购自美国Gibco公司；Trizol试剂和Lipofectamine2000 试剂盒购自美国Invitrogen 公司；逆转录试剂盒和PCR 试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司；引物序列由上海生工生物技术公司提供；miR-335-3p 模拟物（miR-335-3p mimics）以及miRNA 阴性对照购自广州锐博生物有限公司；噻唑蓝（MTT）购自美国Sigma 公司；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）凋亡检测试剂盒、RIPA裂解液和BCA 蛋白检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所；小鼠双微体基因（MDM2）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（P21）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体购自美国Santa Cruz 公司；……