司 玮，张芬芬，王春梅，刘素素，岳 娟，简守珺，张红敏

1)郑州大学人民医院眼科；河南省立眼科医院；河南省眼科学与视觉科学重点实验室 郑州 450003 2)德州市人民医院眼科 山东 德州 253003

真菌性角膜炎是一种临床上常见的致盲性、真菌感染性眼病，是我国角膜移植的主要原因[1-3]。真菌性角膜炎免疫反应过程中，中性粒细胞发挥着关键的抗真菌作用[4-6]。我们前期的研究显示，血小板围绕真菌性角膜炎小鼠模型真菌感染病灶形成血小板浸润带；腹腔注射血小板中和抗体去除血小板后，真菌性角膜炎感染严重，菌丝量大，角膜临床症状加重；提示血小板参与了角膜的抗真菌感染过程(未发表资料)。近来许多研究[7-10]表明，血小板除了在血栓形成和止血中发挥调节功能外，在免疫防御方面也发挥着重要作用。我们采用中性粒细胞、血小板和真菌体外共培养的方法，观察血小板的体外抗真菌作用，为真菌性角膜炎的治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

1.1.1实验试剂 RPMI 1640培养液、红细胞裂解液(北京索莱宝科技有限公司)；马铃薯葡萄糖琼脂培养基(青岛海博生物技术有限公司)；EDTA-K2抗凝管(湖南三力医用科技发展有限公司)；Percoll分离液(美国GE Healthcare公司)；瑞姬氏染液(南京建成科技有限公司)；钙荧光白(美国Fluka公司)；抗人CD41a-PE、抗人CD15-FITC、FITC-Annexin V/PI凋亡检测试剂盒(美国BD公司)。

1.1.2实验仪器 细胞培养箱(美国Thermo Fisher Scientific公司)、真菌生化培养箱(中国广东省医疗器械厂)、离心机(美国Beckman Coulter公司)、微量移液器(法国Gilson公司)、转盘共聚焦显微镜(英国Andor公司)。……