雷 超，刘锋军，徐飞燕

（1.渭南市检验检测研究院，陕西渭南 714000；2.陕西省发酵产品质量监督检验中心，陕西渭南 714000）

氨基酸是含有氨基和羟基的一类有机化合物，是组成蛋白质的基本单位[1]，对发酵产品而言，也是重要的风味物质[2-3]，其含量的高低直接影响产品的口感和营养价值，在现有的酵素相关标准中，也明确规定了游离氨基酸的质量指标[4-5]。本文通过采用不同前处理方法，对不同酵素样品中游离氨基酸检测方法进行比较分析，筛选出一种操作简便，准确可靠的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

氨基酸混合标准溶液、茚三酮试剂套装（Sykam公司）；甲醇、无水乙醇（色谱纯，天津科密欧），其他试剂均为分析纯；超滤离心装置（截留分子量MWCO 10 000）；测试样品为1#桑葚酵素原液，2#果蔬汁复合酵素，3#富平柿子酵素。

1.2 仪器与设备

S-433D全自动氨基酸分析仪（Sykam公司）；BT-224S电子天平（赛多利斯）；冷冻离心机（上海安亭）。

1.3 试验方法

1.3.1 样品前处理

称取0.5～2.0 g（精确至1 mg）混匀试样，置于10.0 mL容量瓶中备用。按以下3种方法提取净化。

方法A磺基水杨酸净化法：加入2%（m/m）磺基水杨酸溶液溶解并定容至刻度，混匀后全部转移至50 mL离心管中，涡旋振荡1 min后静置1 h，10 000 r/min离心15 min，取上清液过0.22 μm滤膜后上机分析。

方法B乙醇溶液净化法：加入85%（v/v）乙醇溶液溶解并定容至刻度，混匀后全部转移至50 mL离心管中，涡旋振荡1 min后静置1 h，10 000 r/min离心15 min，准确吸取上清液2.0 mL于表面皿中，40 ℃水浴蒸干。准确加入 2.0 mL样品稀释液溶解，过0.22 μm滤膜后上机分析。

方法C离心式超滤净化法：加入超纯水溶解并定容至刻度，超声提取15 min，待溶液冷却后吸取4mL样液，通过0.22 μm滤膜后注入超滤离心管中，12 000 r/min离心 20 min，吸取超滤液2.0 mL于表面皿中，接下来同方法B。……