肖素军， 肖亚君， 吴培赛， 彭忠田

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是常见的慢性肝病，临床上组织学和影像学检查显示超过5%肝细胞出现脂肪变性[1]，且无继发性病因，如药物、过量饮酒等。在全球范围内，NAFLD的发病率约为25%[2]。尽管脂肪变性本身是相对良性且可逆的，但仍有8%～20%的单纯肝细胞脂肪变性会进展为非酒精性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)，甚至肝纤维化或肝癌[3-4]。NAFLD的主要发病机制是脂质代谢失衡以及肝脏脂毒性的产生。研究表明，自噬在NAFLD的发生和发展中也起着至关重要的作用[5-9]。水飞蓟宾(silibinin)是从水飞蓟的果实中提取的水飞蓟素，是一种包含活性黄酮木素和类黄酮的混合物，具有清除自由基、抗氧化和抗炎症的功能[10]。目前水飞蓟宾在临床上主要用于治疗慢性肝炎、急性肝炎、肝脏脂肪变性以及肝硬化等疾病，但对于其是否通过激活自噬通路机制来缓解NAFLD，目前仍鲜有研究。鉴此，本研究旨在通过构建油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性模型，探讨水飞蓟宾缓解HepG2细胞脂质沉积的机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1主要材料 HepG2细胞由湖南医药学院生物医学中心保存并提供。主要试剂和仪器：水飞蓟宾(sigma,Lot:6015V52LB)、油酸(sigma,Lot:0459K0731V)、氯喹(Macklin,CAS:54-05-7)、油红O(sigma-aldrich，O9755)、重组Anti-LC3B抗体(abcam,ab192890)、GAPDH抗体(proteintech,10494-1-AP)、HRP-抗兔IgG(中杉金桥，ZB-5301)、甘油三酯(triglyceride，TG)检测试剂盒(南京建成，A110-1-1)、BCA检测试剂盒(碧云天，BD0028)、显微镜(奥林巴斯BX53)、凝胶成像系统(Tanon-5200)、SpectraMax M5-多功能酶标仪。

1.2实验方法

1.2.1 药物配置 (1)水飞蓟宾：溶解于DMSO中，配置成1×104μM母液，使用时稀释1 000倍，终浓度为10 μM。(2)氯喹:溶解于双蒸水中，配置成60 mM母液，使用时稀释1 000倍使用，终浓度为60 μM。(3)油酸：溶解在无水乙醇中，配置成40 mM母液，70 ℃水浴30 min助溶，用0.22 μm滤器过滤除菌，-80 ℃分装保存，使用时用1%无脂肪酸BSA-MEM培养基稀释100倍，终浓度为0.4 mM。……