黎昌江 李秋慧 洪 娟 陈方安 郭翠玲

年龄相关性黄斑变性(AMD)是好发于50岁以上老年人并累及黄斑部的不可逆性视网膜退行性病变[1]，其发病机制复杂[2]。视网膜色素上皮(RPE)细胞死亡是AMD发病的主要原因[3]。为了维持光感受器的新陈代谢，RPE细胞比其他细胞需要更多的氧气，当暴露于过多的活性氧(ROS)环境中，RPE细胞会发生线粒体功能障碍，甚至凋亡，进而导致光感受器萎缩和视力丧失[4-5]。黄芪甲苷(AS-IV)是传统中草药黄芪的主要活性成分，具有抗氧化和抗凋亡作用[6]。PINK1/Parkin通路对调节细胞线粒体损伤至关重要，激活它可促进细胞吞噬作用，保护细胞免于死亡和凋亡[7]。本研究通过建立RPE细胞蓝光损伤模型，探讨AS-IV对蓝光诱导损伤的RPE细胞的保护作用及其机制，以期为AMD的临床诊治提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料ARPE-19细胞(美国典型菌种保藏中心)，DMEM/F12培养液、胎牛血清和胰蛋白酶(美国Gibco公司)，CCK-8检测试剂(南京建成生物研究所)，Annexin V-FITC/PI 流式细胞检测试剂盒(美国BD公司)，细胞线粒体分离试剂盒(上海碧云天生物试剂公司)，2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针和JC-1荧光探针(美国Invitrogen公司)，蛋白定量试剂盒(美国Pierce公司)，鼠抗人细胞色素C(Cyt C)多克隆抗体、鼠抗人Cyt C氧化酶IV亚型多克隆抗体、鼠抗人LC3B多克隆抗体、鼠抗人PINK1单克隆抗体、鼠抗人Parkin单克隆抗体(美国ABGENT公司)，免疫印迹二抗IgG(美国Abcam公司)。将纯度>98%的AS-IV(美国GlpBio公司)溶于二甲基亚砜中(浓度为200 g·L-1)，临用前以新鲜的DMEM/F12培养基稀释到所需浓度(二甲基亚砜的体积分数不超过0.1%)。

1.2 实验方法