王尚徐，林先和

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是由于心脏冠状动脉狭窄、闭塞而导致的心肌急性缺血缺氧［1］。急诊介入手术可迅速疏通病变的血管，恢复缺血心肌的血氧供应，是目前治疗时间窗内AMI的主要治疗方法［2］。然而，在血供恢复的同时，缺血部位血流的再灌注也会对心肌细胞造成额外的损伤，称为心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）。MIRI涉及氧化应激、炎症反应、线粒体功能紊乱和细胞内钙超载，并可通过细胞凋亡发展为不可逆转的细胞死亡［3-4］。沉默信息调节因子2相关酶类3（silent mating type information regulator 2 homolog 3，SIRT3）是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性去乙酰化酶，为线粒体蛋白去乙酰化的主要调节因子［5］。已有研究发现，在MIRI过程中，SIRT3通过激活AMPK-mTOR、FOXO3a-Pink1-Parkin通路激活自噬，同时也可通过SIRT3-SOD2-mROS通路抑制自噬过程［6］。叉头盒转录因子O1（forkhead box O1，FOXO1）参与细胞氧化应激、凋亡和自噬，并且响应细胞刺激，发挥维持组织稳态的作用［7］。既往研究发现，SIRT3可通过促使FOXO1去乙酰化来诱导自噬，从而改善心肌细胞肥大现象［8］。目前有关SIRT3-FOXO1调控自噬在MIRI过程中发挥作用的研究甚少，本研究在细胞水平构建MIRI模型，旨在探究SIRT3-FOXO1通路在MIRI过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 细胞系、主要试剂及仪器 大鼠H9C2心肌细胞及高糖DMEM培养基购自武汉普诺赛公司。慢病毒感染试剂盒购自上海汉恒公司，SIRT3抑制剂3-TYP购自GLPBIO公司，乙酰化FOXO1（Ac-FOXO1）抗体购自赛默飞公司，SIRT3抗体及GAPDH抗体购自Affinity公司，LC3B抗体及Beclin1抗体购自Cell Signaling公司，Bcl-2抗体及Bax抗体分别购自Bioss公司和Abcam公司。逆转录及荧光定量PCR试剂盒购自TaKaRa公司。Annexin V-APC∕7-AAD荧光双染凋亡试剂盒购自Elabscience公司，乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒购自日本世诺公司，倒置荧光显微镜购自蔡司公司，流式细胞仪及全自动生化仪分别购自贝克曼和日立公司。……