陈茜 陈瑞

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmo⁃nary disease，COPD），是一种常见的、可预防可治疗的疾病，常与吸入有毒颗粒或有害气体有关，多引起气道和/或肺泡异常，导致持续的呼吸道症状和气流受限［1］。香烟烟雾暴露与COPD 发病相关［2］。

既往的研究多探讨COPD 与固有免疫和T 细胞免疫的关系，而B 细胞免疫与COPD 的相关研究较少。本研究通过烟熏法构建小鼠COPD 模型，采用免疫组化和流式细胞术检测肺组织及脾脏中B细胞变化，探讨香烟烟雾诱导的B 细胞免疫改变在COPD 发病机制中的作用。

1 材料及方法

1.1 实验动物与材料（1）动物来源：5 周龄SPF级C57BL/6小鼠采购自广州中医药大学实验动物中心；（2）红梅牌香烟；（3）试剂：PRMI⁃1640，DNaseⅠ和胶原酶Ⅱ，BAFF ELISA 检测试剂盒，CD19、B220、CD138 抗体。

1.2 建模及标本处理（1）小鼠COPD 模型构建将12 只小鼠随机分为对照组（CON 组）和烟熏组（CS 组）。CS 组小鼠放入烟熏箱，每天4 次，每次10 支香烟熏1 小时，共20 周。（2）小鼠体重称量小鼠进行体重称量（精确到0.01 g）。（3）肺功能检测在小鼠腹腔注射阿佛丁（0.4-0.75 mg/g）麻醉后，气管插管连接小动物活体肺功能检测仪（DSI BuxcoFinePointe；Whole Body Plethysmography，美国）进行肺功能检测。（4）肺泡灌洗液（BALF）的收集气管插管后用0.4 ml PBS 灌注右肺6 次，收集BALF，离心后进行细胞沉淀计数。（5）肺组织的处理液氮研磨提取肺组织蛋白，ELISA 检测BAFF 含量；肺组织固定石蜡包埋，切片后行HE染色和免疫组化，检测CD19 阳性细胞。（6）脾脏细胞悬液流式细胞术将新鲜脾脏消化为单细胞悬液，流式抗体孵育30 min 后，在Cytoflex 仪上行流式检测CD19、B220 和CD138 阳性细胞（Beck⁃man，美国）。

1.3 统计学分析采用SPSS 25.0 软件进行统计学分析，计量资料以（）表示，组间相互比较采用t检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 COPD 小鼠模型构建CS 组小鼠精神萎靡、活动量及食欲减退、生长发育缓慢、毛发晦暗枯黄、呼吸道分泌物增多等。……