MiR-155调控Wnt/β-catenin信号通路影响非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和DDP耐药性的研究

2021-12-02龚春梅徐敬根彭玲邓春燕

中国保健营养 2021年31期

龚春梅徐敬根彭玲邓春燕

成都市双流区第一人民医院，四川成都 610200

非小细胞肺癌(NSCLC)是由上皮引起的恶性肿瘤，最常见于肺实质，并可侵袭转移周围邻近组织，在实体瘤恶性肿瘤发病率中居于首位[1]。DDP是治疗非小细胞肺癌的重要化疗药物，被用于非小细胞肺癌的辅助治疗，可促进肿瘤细胞死亡[2]。然而，在非小细胞肺癌治疗中存在 DDP耐药的发生，导致治疗效果差。

在肿瘤调节过程中，microRNAs(miRNAs)作为癌基因或肿瘤抑制因子发挥作用，microRNAs有助于探索非小细胞肺癌进展的发病机制[3]。既往研究显示，miR-155在多种肿瘤中均发挥重要功能，可以被作为肿瘤预后相关的标记物[4]。我们的研究探讨miR-155在非小细胞肺癌发生、发展以及DDP耐药性机制。

1 材料与方法

1.1Real-time PCR检测各组A549细胞和A549/DDP细胞中miR-155和Bax和Bcl-2的表达

采用Trizol试剂提取各组A549细胞和A549/DDP细胞，进行DNA反转录合成。引物依据各基因序列(见表1)。对目的基因进行Real-time PCR检测。根据2-△Ct法进行半定量分析。

表1 引物序列

1.2Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达变化 BCA法蛋白定量后于-20℃保存。分离蛋白利用10%SDS-PAGE电泳，并将胶用半干转膜法转移至PVDF膜，100mA,1.5h去除非特异性背景利用室温，5%脱脂奶粉作用，2 h。分别加入一抗1:1000，1:1500稀释的Wnt1，β-catenin单抗，摇床，4℃，过夜，避光条件下加入1:2000羊抗兔二抗，孵育30 min，PBST洗涤，化学发光剂显色1 min，X片曝光成像，观察结果。