截短型水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E 的原核表达及免疫原性评价
2021-11-26李春明王丽马成刘佳羽许源航牟忠梅
李春明,王丽,马成,刘佳羽,许源航,牟忠梅
1. 长春祈健生物制品有限公司,吉林长春 130012;2. 上海倍谙基生物科技有限公司,上海 200120;3. 赤峰学院附属医院,内蒙古赤峰 024005
水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)是引起水痘和带状疱疹两种疾病的病原体,其基因组大小为125 000 bp,编码67 种蛋白,含12 种糖蛋白,其中糖蛋白E(glycoprotein E,gE)、gB、gH、gI、gC、gL、gK 和gM 研究较为广泛,这些糖蛋白主要分布在病毒囊膜和感染细胞的胞膜上,与病毒的致病性和免疫原性密切相关。
gE 在病毒表面表达较高,含有T、B 细胞表位,是免疫原性和反应原性最强的糖蛋白。有研究采用类病毒颗粒(virus-like particle,VLPs)、昆虫细胞、中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)等不同表达系统制备了不同长度的gE 蛋白,并对其免疫原性进行了分析,结果表明,gE 具有较强的免疫原性,可作为重组疫苗的候选抗原[1-4]。葛兰素史克公司(GSK)采用CHO 细胞表达了gE 胞外区蛋白,并辅以AS01B 佐剂,制备了带状疱疹疫苗shingrix,临床效果明显优于减毒带状疱疹疫苗,表明抗原的选择和佐剂的使用尤为重要[5-8]。但CHO 细胞表达系统对重组蛋白的表达量较低,且培养周期长,导致产业化生产面临较大困难。原核表达系统是指通过基因克隆技术将外源目的基因插入表达载体,并导入表达菌株,使其在特定原核生物或细胞内表达,常用于生物工程领域,该方法具有成本低、易操作、培养周期短,产量高等优点。因此,本实验通过原核表达系统制备VZV gE 蛋白,并评价其免疫原性,为带状疱疹重组亚单位疫苗的研究提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 细胞、病毒、菌株及载体 第32 代二倍体细胞(2BS 株)及第48 代VZV 由长春祈健生物制品有限公司研究室保存;……
