苏晓叶，高磊，程亚君，李倩，田雨，刘刚

北京智飞绿竹生物制药有限公司，北京 100176

现行多糖纯化分离技术多采用传统的乙醇沉淀与苯酚抽提工艺［3-6］，该工艺过程伴随复杂的反复超滤离心及透析，时间周期长，且过程引入强毒性苯酚［7-8］，影响产品安全性及产品质量。因此，近年来，采用现代化的生物技术纯化制备细菌荚膜多糖已成为新的趋势［9-15］，关于多糖层析纯化的相关研究多采用Capto Adhere 与Capto DEAE 串联的方法（命名为：流穿模式多糖层析）去除脑膜炎粗多糖样品中的蛋白杂质［16-20］。脑膜炎球菌多糖可流穿式快速通过层析柱，大量蛋白质等杂质则因强电负性而被吸附至层析介质上，最终达到多糖纯化的目的。本文对该技术应用于C 群脑膜炎球菌多糖分离纯化的工艺条件进行了优化，在以往研究的基础上进一步分析缓冲液中SDC 含量、粗多糖浓度以及上样量对层析纯化的影响，以期在保证分离效果的基础上，尽可能增大单次纯化处理量。

1 材料与方法

1. 1 多糖 C 群脑膜炎球菌粗多糖是C 群脑膜炎球菌经十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）处理及乙醇分步沉淀的粗糖，由北京智飞绿竹生物制药有限公司制备并提供。

1. 2 主要试剂及仪器 Tris 试剂及脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate，SDC）购自美国Sigma 公司，均为分析纯；Capto Adhere 和CaptoDEAE 凝胶、AKTApliot 层析系统购自美国GE 公司。

1. 3 多糖样品预处理 取C 群脑膜炎球菌粗多糖溶于100 mL 1. 0% Tris-HCl 溶液（pH 8. 0）中混匀，析出白色固体，过夜反应；1 500 × g 离心10 min 后，经0. 22 μm 一次性滤膜过滤，收集滤液。

1. 4 层析纯化 将XK16／40 Capto Adhere 和XK 16／20 Capto DEAE 柱串联，缓冲液平衡后，将预处理后的多糖样品上样。……