重组人肠道病毒71 型病毒样颗粒等电点全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定方法的建立及验证

2021-11-26王文伟何成王蓓楼觉人

中国生物制品学杂志 2021年11期

关键词：方法

王文伟，何成，王蓓，楼觉人，

1. 上海至成生物科技有限公司，上海 200051；2. 上海生物制品研究所有限责任公司，上海 200051

等电点（isoelectric point，pI）是蛋白质的一种物理化学属性，在一定的pH 条件下，蛋白质的氨基酸分子所带的正、负电荷相等，即净电荷为零，此时的pH 称为该蛋白质的pI［1］。pI 的测定能够反映蛋白药物的电荷异质性，广泛应用于重组蛋白药物的质量评价，是重组蛋白药物质量控制的一个重要手段［2-4］。

等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）电泳是测定蛋白质pI 的常用方法，包括凝胶等电聚焦（gelbased isoelectric focusing，gIEF）电泳、毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing，CIEF）电泳和全柱成像毛细管等电聚焦（whole column imaging detectioncapillary isoelectric focusing，WCID-CIEF）电泳。IEF 的基本原理是：两性电解质在电场下形成一个pH 梯度，当待测样品迁移至某一pH 位置时，其所带的净电荷为零，不再移动，则该处的pH 值即为样品的pI［5-6］。gIEF 所能分离的分子量范围较小，分辨率低，准确度差，无法满足重组病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs）等生物大分子pI 的测定。传统的CIEF 在聚焦完成后，需将样品区带迁移至检测窗口，在迁移过程中易导致蛋白质聚集或沉淀，谱带展宽，从而影响分离度和分辨率。WCID-CIEF 克服了传统CIEF 的不足，聚焦完成后无需进行样品迁移，聚焦和检测能够同步完成，广泛应用于重组蛋白药物pI 的测定和电荷异质性的分析［7-10］。

重组人肠道病毒71 型（enterovirus 71，EV71）VLPs由病毒的衣壳蛋白VP0、VP1 和VP3 组装而成，直径约30 nm［11-12］，结构复杂，分子量大（约5 660 000），目前鲜有对重组EV71 VLPs pI 研究的报道。本研究旨在建立重组人EV71 VLPs pI WCID-CIEF 测定方法，并对方法进行验证。