杨振 张红珠 张伟 付婷婷

济南市第七人民医院消化内科 250101

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，其病死率高居肿瘤病死率的第2 位［1-2］。化疗是胃癌术后的主要治疗措施，而耐药性的产生直接关系化疗的成功。以顺铂为代表的化疗药物是胃癌化疗的一线药物，长期用药效果饱受耐药性及毒副作用影响［3］。文献指出，Yes 相关蛋白 1（yes-associated protein 1，YAP1）在多种恶性肿瘤中的差异表达与细胞的增殖关系密切［4-5］。徐岗等［6］研究发现，干扰 YAP1 可增强食管癌对顺铂的化疗敏感性，提示YAP1可能在肿瘤耐药形成中发挥作用。前期研究结果显示，胃癌组织中YAP1蛋白表达明显高于癌旁正常组织。目前关于胃癌中YAP1 与化疗敏感性的研究尚未见报道，我们推测胃癌中YAP1蛋白的表达与顺铂敏感性相关。为验证该观点，2019 年1 月至2020 年12 月，本研究拟通过构建干扰胃癌细胞中YAP1 表达，探究YAP1对胃癌细胞顺铂敏感性的影响及作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 细胞 实验用人正常胃上皮黏膜细胞GES1 和人胃癌细胞SGC-7901 购于美国模式培养物保藏所（American Type Culture Collection，ATCC）。

1.1.2 主要试剂 RPMI1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）培养基、DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基、胎牛血清（美国Gibco 公司）；裂解液Trizol（美国Invitrogen 公司）；二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒（美国Sigma公司）；实时荧光定量逆转录试剂盒、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）试剂盒（日本TaKaRa 公司）；鼠抗人β-actin 抗体、鼠抗人 YAP1 抗体、鼠抗人 IGF 抗体、鼠抗人Akt抗体、鼠抗人TGF-β抗体（美国Abcam公司）。

1.1.3 主要仪器 Ⅸ73 倒置荧光显微镜（日本OLYMPUS 公司）；7500 Real-Time 定量PCR 仪（美国Thermo Fisher Scientific-CN 公司）；Spectra Max iD5 酶标仪（美国molecular devices 公司）；PE2400 电泳仪、GelDOC2000 型凝胶成像分析系统（美国Bio-Rad公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养与传代 人正常胃上皮黏膜细胞GES1 置于含10%胎牛血清RPMI1640 培养基中，人胃癌细胞SGC-7901 置于含10%胎牛血清DMEM 培养基中，于37 ℃、5%CO2的培养箱中常规培养。……