沈彩红，孙 林，黄文杰，沈永奇，卢永刚，孙一帆△

(广西医科大学附属柳铁中心医院：1.感染科；2.检验科；3.肿瘤科；4.肝胆外科，广西柳州 545007)

肝癌是常见的恶性肿瘤之一，其在肿瘤中的发病率位列第4，病死率位列第3[1]。肝癌具有较高的发病率和病死率，急切需要有效的早期诊断。目前，肝癌早期诊断较为理想的血清标志物为甲胎蛋白，但由于其特异度不高，故亟待探索其他有助于肝癌早期有效诊断的生物标志物。近年来，外泌体在肿瘤疾病中的作用已成为研究热点之一。外泌体中含大量核酸、蛋白、脂质等物质，参与了细胞之间或细胞与组织间的通讯，影响肿瘤的发生、发展。环状RNA(circRNA)作为外泌体内含物中的一种核酸，随着RNA测序技术的迅速发展，大量circRNA被发现与肿瘤的发生存在潜在的关联，发挥了重要的调控作用，具有巨大潜力，因此，其有可能成为肝癌早期筛查的一种新型生物标志物[2]。本研究通过对肝癌HepG2细胞外泌体与正常肝细胞LO2共同培养后circRNA表达进行比较，筛选验证了具有差异表达的circRNA，并预测分析了其在肝癌发展的作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

外泌体提取试剂盒(美国Thermo公司)、总RNA提取试剂盒(美国Qiagen公司)、Trizol试剂(美国Invitrogen公司)、Arraystar Super RNA Labeling Kit(美国Arraystar公司)、Arraystar Human circRNA Arrays V2(美国Arraystar公司)、SYBRGreen 聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)试剂盒(美国Thermo公司)、逆转录试剂盒(美国Thermo公司)、AB7500荧光定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)、低温冷冻离心机(美国Sigma公司)、Agilent Hybridization Oven、Agilent Scanner G2505C、Nanodrop ND-1000等。实时荧光定量 PCR所用引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，序列见表1。

表1 实时荧光定量……