张子悦纪 艺冉 强魏 巍王 宇李 亮蔡 健陈笑芸

（1.阜阳师范大学生物与食品工程学院，安徽阜阳236037；2.浙江省农业科学院农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室，杭州310021；3.中国农业科学院生物技术研究所，北京100081）

柑橘黄龙病又称黄枯病、青果病，是柑橘行业最严重、最具有毁灭性病害之一，是我国主要植物检疫对象。致病菌属于革兰氏阴性细菌的α－变形菌纲韧皮部杆菌属[1]。据报道，该类韧皮部杆菌是一种极难培养的细菌，迄今为止没有成功培养的先例[2]，为柑橘黄龙病的有效防治增添了巨大的阻碍。植物一旦感染黄龙病，叶片出现斑驳型黄化，淀粉的积累量是其他逆境胁迫的20倍，果实呈畸形，果小味酸，严重影响生理营养品质[3]，使得柑橘品质显著下降。

为了及时切断感染源，应当进一步推进和加强黄龙病菌的快速检疫和诊断工作。黄龙病病原菌的检验主要基于分子生物学水平，有核酸分子杂交检疫技术，基因芯片技术，常规PCR、巢式PCR、半巢式PCR、定量PCR检测技术等。

实时荧光PCR（qPCR）与传统的PCR技术相比具有特异性强、敏感度高、重复性好的优点，是1996年美国首次推出的一种核酸检测技术。2004年，廖晓兰等[4]首创基于柑橘黄龙病病原菌16S rDNA的qPCR检测方式，为黄龙病的定量快速检测开创了先河。2006年，LI等[5]针对黄龙病病原菌的16S rDNA首次开发了定量、多重、实时、荧光PCR反应，可同时检测亚洲、非洲、美洲3种黄龙病，可在不到1h的时间内检测病原体。2007年，胡浩[6]又利用qPCR探究了柑橘病原菌在宿主体内结构的分布情况，得出病原菌会集中在富含筛管组织的部分，如种皮、橘络、叶脉等都是韧皮部杆菌聚集地的结论。……