刘 萍，杨麦巧，杨也天，王一婷，刘丽丽，马元平，王 芳，何 川

（1.昆明医科大学附属延安医院麻醉科，云南昆明 650051；2.昆明医科大学影像系，云南昆明 650500）

先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是新生儿最为常见的先天畸形之一，发病率占全部活产婴儿的7%～8%，是导致人类孕期流产、死胎和新生儿发育缺陷甚至死亡的主要原因之一[1]。心脏胚胎发育过程中，细胞的生物学行为和功能改变所致的心脏发育异常是CHD的始动环节[2]。心脏发育涉及许多相关基因和多条信号通路，精确调控细胞的增殖、迁移和分化，其中任意基因的异常所引起的心脏发育受损都有可能导致CHD的发生[2]。非编码微小RNA（microRNA、miRNAs）被 报 道 可 通 过 促 进mRNA降解或阻断蛋白质翻译，参与基因转录后调控。近期多项研究表明，miRNAs广泛参与到细胞代谢、增殖和凋亡等的调节过程[3]，与心脏发育、心脏疾病的发生密切相关[4-5]。例如，miR-34a通过调节Notch通路信号转导参与心脏发育调控，增加了小鼠CHD风险[6]。miR-29c也被报道调控P19细胞的生物学行为，与CHD发生相关[7]。miR-29b-3p被报道在CHD患者血清中异常低表达[8]，但对于miR-29b-3p在CHD的作用机制未见报道。本研究旨在进一步研究CHD的发病和调控过程中miR-29b-3p的作用和分子机制，为探寻新的诊断标志物提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞和试剂P19细胞购自美国菌种保藏中心（American Type Culture Collection,ATCC），Taq⁃Man MicroRNA逆转录试剂盒购自美国Life Technology公司；CCK-8试剂盒购自上海麒盟生物科技有限公司；Lipofactamine 3000、Trizol提取试剂盒、GeneTai⁃lor Site-Directed Mutagenesis System购自美国Invit⁃rogen公司；α-MEM培养基、胎牛血清FBS、青霉素、链霉素、2.5 mL/L胰酶购自美国Gibco公司；二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）购自美国Sigma公司；兔抗鼠cTnT、Mef2c、GATA 4抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗购自英国Abcam公司；……