刘立波，刘志坚，陈丽娜，刘晓红，李秀昌

1 山东第一医科大学第二附属医院心脏中心，山东泰安271000；2 山东第一医科大学研究生部

心肌纤维化（MF）是可逆转的病理过程，但尚缺乏明确的干预措施［1］。脂联素（APN）是具有广泛生物学效应的内源性激素，具有调节糖脂代谢、抗炎、抗动脉粥样硬化等生物学作用［2］。本课题组前期临床研究发现，血浆APN 水平与MF 程度有明确的相关性；并且经动物模型实验证实，APN 具有抑制MF发生发展的作用［3-4］。2014 年 10 月—2017 年 10 月，我们在前期研究基础上通过体外实验观察APN 对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心脏成纤维细胞（CF）增殖及细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）信号的影响，为探讨APN抑制MF的机制提供参考。

1 材料与方法

1.1 动物、试剂及仪器 清洁级1～3 日龄C57 小鼠10 只，雌雄不限，体质量（3.0 ± 0.6）g。亲代鼠购于山东大学实验动物中心，许可证号：SCXK（鲁）2013-0009，依托实验动物中心饲养、繁殖。本研究所涉及实验动物的相关处置均通过伦理学委员会审查。重组小鼠APN 购自武汉华美生物科技有限公司；AngⅡ购自成都西亚化工股份有限公司；抗Vimentin 抗体购自美国CST 公司；抗DDR2 抗体购自美国Santa Cruz 公司；HRP 标记的山羊抗兔抗体购自北京康为世纪生物科技有限公司；ERK1/2 兔抗鼠单克隆抗体、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）兔抗鼠单克隆抗体购自美国bioworld 公司；罗丹明和FITC 荧光素标记的山羊抗兔第二抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。酶标仪购自瑞士TECAN 公司；Western blotting 电泳仪、电泳槽购自美国伯乐Bio-Rad 公司；倒置荧光显微镜购自日本Olympus 公司；二氧化碳培养箱购自日本三洋公司。……